Kādas ir tuberkulozes pazīmes bērniem, kas nav manta. Tuberkulozes laboratoriskā diagnostika.

Kas ir tuberkuloze?

Tuberkuloze (TB) ir infekcija gaisā, kas galvenokārt skar cilvēka plaušas.

Kas ir apdraudēts

Neskatoties uz to, ka tuberkuloze tagad ir mazāk izplatīta, daži bērni, visticamāk, nekā citi riskē.

Riski ir:

• bērni, kas dzīvo ģimenē, kurā ir pieaugušais atvērta forma  vai tuberkulozi augsts risks  TB infekcija zemas imunitātes dēļ;
• bērni, kas inficēti ar HIV vai cieš no citām slimībām, kas būtiski vājina imūnsistēmu;
• bērni, kas dzimuši valstī, kur tuberkuloze ir plaši izplatīta;
• bērni, kas apmeklē valstis, kurās tuberkuloze ir endēmiska, vai kam ir ilgstošs kontakts ar cilvēkiem, kas pastāvīgi dzīvo šādās valstīs;
• bērni no vietām, kur medicīniskā aprūpe ir zema;
• bērni, kas dzīvo internātskolā vai ģimenē, no kuriem viens no viņiem iepriekš bija cietis.

Tuberkulozes izplatība

Parastais veids, kā izplatīt šo infekciju, ir gaisā: slims pieaugušais klepus un baktērijas iekļūst gaisā. Kopā ar gaisu bērns tos ieelpo un tādējādi inficējas. Bērni līdz desmit gadu vecumam, kas cieš no plaušu tuberkulozes, reti inficē citus cilvēkus, jo tiem parasti ir ļoti mazs baktēriju daudzums izdalītajā gļotā un salīdzinoši neproduktīvs klepus.

Par laimi, lielākā daļa bērnu, kas bijuši saskarē ar tuberkulozes izraisītājiem, neslimo. Kad baktērijas sasniedz bērna plaušas, organisma imūnsistēma iznīcina „ienaidnieku” un novērš infekcijas izplatīšanos tālāk. Šiem bērniem rodas asimptomātiska infekcija, ko atklāj tikai pozitīva reakcija uz ādas testu. Tomēr bērni ar asimptomātisku tuberkulozi vēl ir jāārstē, lai novērstu turpmāku slimības progresēšanu.

Simptomi

Laiku pa laikam nelielā skaitā bērnu, kas palikuši bez pienācīgas ārstēšanas, infekcija sāk strauji attīstīties, izraisot drudzi, nogurumu, aizkaitināmību, noturīgu klepu, vājumu, smagu un / vai ātru elpošanu, nakts svīšanu, limfmezglu iekaisumu, svara zudumu un augšanas aizkavēšanos.

Dažiem bērniem (galvenokārt jaunākiem par četriem gadiem) tuberkulozes patogēni var izplatīties asinsritē, ietekmējot gandrīz jebkuru orgānu. Šajā gadījumā slimība prasīs daudz sarežģītāku ārstēšanu, un jo ātrāk tā sāksies, jo labāks būs rezultāts. Šādi bērni ar augstu varbūtības pakāpi var attīstīt tuberkulozo meningītu - šīs slimības visbīstamāko formu, kas ietekmē smadzenes un centrālo nervu sistēmu.

Diagnostika

Bērniem, kuri pastāvīgi pakļauti TB infekcijas riskam, regulāri jāveic ādas tuberkulozes testi.

Jūsu bērnam var būt nepieciešams ādas tests, ja atbildējāt vismaz uz vienu no jautājumiem:

• Vai kādam no ģimenes locekļiem vai cilvēkiem, ar kuriem jūsu bērnam bija saskare, bija tuberkuloze?
• Vai kādam ģimenes loceklim bija pozitīvs tuberkulīna ādas tests?
• Vai jūsu bērns ir piedzimis augsta riska tuberkulozes valstī (visas valstis, izņemot ASV, Kanādu, Austrāliju, Jaunzēlandi un Rietumeiropu)?
• Vai jūsu bērns vairāk nekā vienu nedēļu apmeklēja augsta riska tuberkulozes valsti un sazinājās ar vietējiem iedzīvotājiem?

Testu veic pediatru birojā (vai klīnikas ārstēšanas telpā), injicējot tuberkulīnu (organisko vielu maisījumu, kas satur dažādas grūtības pakāpes, kas iegūts no mycobacterium tuberculosis) apakšdelma ādā. Ja infekcija ir notikusi, Jūsu mazuļa āda uzbriest un sarkanā krāsā parādīsies injekcijas vietā. Jūsu pediatrs pārbaudīs injekcijas vietu 48–72 stundas pēc testa un izmērīs apsārtumu un pietūkumu. Šis ādas tests parādīs, vai infekcija bija baktērija, pat ja bērnam nav simptomu, un viņa ķermenis ir veiksmīgi pārvarējis slimību.

Ārstēšana

• Ja Jūsu bērna ādas tests ir pozitīvs, jums būs nepieciešama krūškurvja rentgenogramma, lai noteiktu aktīvās vai iepriekšējās plaušu infekcijas esamību / neesamību. Ja plaušu rentgena izmeklēšana liecina par aktīvas infekcijas iespējamu klātbūtni, pediatrs nosūtīs Jūsu bērnam skrīningu attiecībā uz mikobaktēriju tuberkulozi izdalīšanā no klepus vai kuņģī. Tas tiek darīts, lai noteiktu turpmāko apstrādi.
• Ja Jūsu bērna ādas tests ir pozitīvs, bet tam nav aktīvas TB infekcijas simptomu vai pazīmju, bērns joprojām ir inficēts un viņam ir nepieciešama ārstēšana. Lai novērstu, ka process kļūst aktīvs, pediatrs izrakstīs izoniazīdu (INH). Šīs zāles jālieto iekšķīgi - vienu reizi dienā, vienu tableti dienā vismaz deviņus mēnešus.
• Ar aktīvo tuberkulozes infekciju pediatrs izrakstīs trīs vai četras zāles. Jums būs jādod bērnam 6–12 mēnešus. Dažreiz ārstēšanas sākumposmā bērns atrodas slimnīcā, lai gan lielāko daļu ārstniecisko pasākumu var veikt mājās.

Cīņa pret tuberkulozes izplatīšanos

Ja Jūsu bērns ir inficēts ar tuberkulozi (neatkarīgi no tā, vai viņam ir simptomi vai nav), ir ļoti svarīgi mēģināt noskaidrot, no kā viņš varētu būt inficēts. Lai to izdarītu, noskaidrojiet, vai kāds no TB simptomiem ir kāds, kurš bija ciešā kontaktā ar slimu bērnu. Ir nepieciešams veikt TB testu un pārbaudīt visus ģimenes locekļus, auklītes, saimniekus, pirmsskolas un skolas iestāžu darbiniekus. Visbiežāk sastopamais tuberkulozes simptoms pieaugušajiem tiek uzskatīts par pastāvīgu klepu, īpaši tādu, ko papildina hemoptīze. Ikviens, kam ir pozitīvs ādas tests, jāpārbauda ārstam un rūpīgi jāpārbauda, ​​ieskaitot krūškurvja rentgenstaru, krēpu izmeklēšanu utt. Ja nepieciešams, šādai personai jāparedz ārstēšana ar noteiktām zālēm.

Pieaugušajiem konstatēta aktīva infekcija  viņš tiks izolēts, cik vien iespējams (īpaši no maziem bērniem) līdz pilnīgas ārstēšanas kursa beigām.

Visiem ģimenes locekļiem, kuri ir bijuši saskarē ar šo personu, parasti ir arī profilaktiski terapeitiski pasākumi - viņi lieto izoniazīdu neatkarīgi no viņu pašu ādas testu rezultātiem. Ikviens, kurš slimo vai kam ir raksturīgas izmaiņas krūšu rentgenogrammā, jāuzskata par aktīvas tuberkulozes nesēju.

Tuberkuloze ir ļoti izplatīta asociēto grupu vidū, kas ir jutīgākas pret slimībām sliktu dzīves apstākļu, sliktas uztura un atbilstošas ​​medicīniskās aprūpes trūkuma dēļ. AIDS pacientiem ir arī lielāks risks saslimt ar tuberkulozi, jo viņiem ir mazāka rezistence pret dažādām infekcijām.

Ja nav ārstēšanastuberkulozes patogēni bērna organismā daudzus gadus var būt neaktīvi, un tie kļūs aktīvāki tikai īpašos periodos - pusaudža gados, grūtniecības laikā vai stresa periodā pieaugušajiem.

Galvenais tuberkulozes drauds ir tas, ka persona ne tikai smagi saslimst, bet arī var izplatīt infekciju citiem. Tādēļ ir tik svarīgi, lai Jūsu bērns tiktu savlaicīgi pārbaudīts tuberkulozes gadījumā, ja viņš ciešā kontaktā ar jebkuru pieaugušo, kam ir pozitīvs ādas testa rezultāts vai kam ir bijusi tuberkuloze, pat ja viņš saņēma savlaicīgu un atbilstošu ārstēšanu.

DIAGNOSTIKAS TUBERKULOZE BĒRNIEM

UN TEENAGERI

Bogdanova E.V., Kiselevich OK

Krievijas Valsts medicīnas universitātes Pthisiopulmonology katedra

Specifisku klīnisko simptomu trūkums un bērnu tuberkulozes klīnisko izpausmju daudzveidība rada nopietnas grūtības slimības diagnostikā. Tāpēc galvenais nosacījums, lai savlaicīgi diagnosticētu tuberkulozi, ir visaptveroša pacienta pārbaude, ko veic TB ārsts.

Bērnu, kuriem nepieciešama konsultācija ar ftizologu, identifikāciju veic vispārējā medicīnas tīkla pediatri vietās un slimnīcās. Pediatram ir jāzina tuberkulozes riska grupas bērniem un pusaudžiem. Bērni un pusaudži no šīm grupām ir jānosūta savlaicīgi, lai konsultētos ar TB speciālistu. Turklāt pediatram ir jārisina tuberkulozes un citu slimību diferenciāldiagnoze.

Bērnu tuberkulozes bojājumu diagnostika ir sarežģīta. Klīniskās izpausmes ir daudzveidīgas, bet tām nav specifisku īpašību. Tuberkuloze bērniem bieži notiek zem dažādu slimību maskām - ARVI, bronhīts uc

Lai diagnosticētu tuberkulozi, fhtisiatrician izmanto obligātās pārbaudes metodes - Obligāts diagnostikas minimums (ODM) kas ietver:

1. Anamnēzes vākšana: bērna ar MBT infekcijas avota un infekcijas avotu identificēšana, kaitīgo medicīnisko un sociālo faktoru identificēšana, tuberkulīna jutības dinamikas novērtēšana Mantoux testā ar 2TE PPD-L;

2. Noteikt sūdzības. Rūpīga uzmanība tiek pievērsta sūdzībām par sliktu apetīti, nemierīgu miegu, nogurumu, uzbudināmību, skolēnu vidū, atmiņu samazināšanos, uzmanību, veiktspējas pasliktināšanos un galvassāpēm; temperatūras paaugstināšanās utt .;

3. Pārbaudes un fiziskās pārbaudes metodes;

1) Rentgena izmeklēšana ļauj vizualizēt plaušu un / vai intratorakālo limfmezglu izmaiņas, kas raksturīgas dažādām tuberkulozes formām. Šim nolūkam veiciet krūšu rentgenstaru priekšējo un sānu projekciju, skartās zonas tomogrāfiju;

2) Asins analīze ļauj noteikt dažas izmaiņas. Aktīvās tuberkulozes gadījumā bieži ir anēmijas un limfopēnijas kombinācija ar sarežģītu tuberkulozi - leikocitozi, kreiso maiņu, monocitozi, paātrinātu eritrocītu sedimentācijas ātrumu.

3) Urīna analīze. Izmaiņas analīzēs nav specifiskas, bet kombinācijā ar citām pazīmēm apstiprina tuberkulozes procesa aktivitāti.

4) Izpētīt krēpu, uztriepi no rīkles aizmugures, lai atklātu biroju, veic vismaz 3 reizes 3 dienu laikā;

5) Individuāla tuberkulīna diagnoze (ādas skrāpēšanas tests, Mantoux tests ar tuberkulīna atšķaidījumiem; slimnīcas Koch testā) - saskaņā ar indikācijām.

Ir 2 patognomoniskos kritērijus    tuberkulozes process:

I. Tuberkulozes izraisītājs ir mycobacterium tuberculosis (MBT).

MBT noteikšana pacienta materiālā norāda uz pacienta ķermeņa patoloģiskā procesa specifiku.

Materiāla izvēle pētījumam ir atkarīga no tuberkulozes klīniskās formas, tuberkulozes procesa fāzes, pacienta vecuma. Visbiežāk tiek pētīta krēpas, bronhu un kuņģa skalošana, izkārnījumi, urīns, biopsija un ķirurģiskais materiāls, pleiras eksudāts utt.

Piemērot šādas mikrobioloģisko pētījumu metodes:

1) Bakterioskopiskā metode :

Bakterioskopiskā pārbaude ir ātrākā, vienkāršākā un lētāka metode skābju rezistentu mikobaktēriju noteikšanai. Tomēr bakterioskopiskā metode ļauj noteikt mikobaktērijas ar saturu ne mazāk kā 5000-10000 1 ml pētītā materiāla. Skābju rezistentu mikobaktēriju mikroskopiskā noteikšana neļauj diferencēt tuberkulozes patogēnu no netipiskām un saprofītiskām mikobaktērijām.

2) Kultūras metode (sēšana barības vielās) ļauj noteikt MBT vairāku desmitu mikrobu šūnu klātbūtnē 1 ml testa materiāla.

Tomēr biroja kultūras pieaugums uz cietas barotnes vidē notiek ilgu laiku - 2-3 mēnešus. Šobrīd ir iegūti šķidri barības vielu mediji, kuros MBT aug 10-14 dienu laikā. Ļoti svarīgi ir pētāmā materiāla piesārņojuma kvantitatīvais novērtējums, kas ļauj novērtēt procesa smagumu, tā prognozi un noteikt ārstēšanas metodes. Kultūras metode ļauj diferencēt MBT no citiem mikobaktēriju veidiem un noteikt zāļu jutību / pretestību pret narkotikām pret tuberkulozi.

3) Bioloģiskā metode - laboratorijas dzīvnieku (īpaši jutīgu jūrascūciņu) infekcija. Tā ir ļoti jutīga metode ļauj iegūt pozitīvu rezultātu, ja pētāmā viela satur pat vienu (1-5) mikobaktēriju. Pētījuma ilgums ir 1,5-2 mēneši. Šo metodi var izmantot tikai federālo pētniecības institūtu laboratorijās.

Katrai no izmantotajām metodēm ir pozitīvi aspekti un noteikti ierobežojumi.

Papildu diagnostikas un diferenciālās diagnostikas testi tuberkulozei ir imunoloģiskie pētījumi un molekulārās bioloģiskās metodes. Šīs metodes ļauj identificēt tuberkulozes izraisītāju, vienlaikus samazinot tā dzīvotspēju. Imunoloģiskās metodes ļauj novērtēt pacienta reaktivitāti, noteikt tuberkulozes procesa aktivitāti, uzraudzīt ārstēšanas efektivitāti, noteikt ķirurģiskās ārstēšanas nepieciešamību, prognozēt konkrēta procesa turpmāko dinamiku.

§ mBT antigēnu un antivielu noteikšana pret tuberkulozes izraisītāju ar fermentu imūnanalīzi (ELISA);

§ mikobaktēriju tuberkulozes DNS noteikšana ar polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metodi.

II . Tuberkulozes granulomas elementi, \\ t   ar histocitoloģiskām metodēm pētītajā materiālā.

Biroja izraisīta nekrozes uzmanības centrā veidojas aizsargājoša iekaisuma reakcija: epitēlija šūnu vārpsta, milzu Pirogova-Langhana šūnas, limfocītu uzkrāšanās.

Morfoloģisko pētījumu iespēja ir saistīta ar zināmām grūtībām, jo dažādos bērnu tuberkulozes klīniskajos gadījumos patoloģiskais materiāls pētniecībai var nebūt pieejams.

Tāpēc, lai savlaicīgi un pareizi diagnosticētu slimību bērniem, klīnisko rentgena laboratorijas datu kompleksa novērtēšanai ir liela nozīme.

Galvenās metodes tuberkulozes noteikšanai bērniem un pusaudžiem

Pašlaik bērnu un pusaudžu tuberkulozes noteikšana ir iespējama, izmantojot šādas metodes:

oMasas tuberkulīna diagnoze . Mantoux tests ar 2 Tu PPD-L tiek izmantots kā masas skrīninga tests.

Masu tuberkulīna diagnostika ir vērsta uz:

Agrīna atklāšana   tuberkuloze bērniem un pusaudžiem;

MBT infekcijas izpēte un primārā infekcijas ikgadējais risks.

Tuberkulīna testi neļauj novērtēt imunitātes pret tuberkulozi intensitāti.

Konsultējoties ar phthisiatrician, sūtiet bērnus no riska grupām    par tuberkulozes attīstību. Riska grupas ietver:

1. Pirmo reizi inficēti ar biroju. Primārās infekcijas faktu nosaka tuberkulīna reakcijas "pagrieziens".

2. Inficēti indivīdi ar hiperergisku jutību pret tuberkulīnu, ko nosaka infiltrāta lielums 17 mm vai vairāk, ir vezikulārās nekrotiskas reakcijas tuberkulīna intradermālas ievadīšanas vietā.

3. Inficētās personas ar paaugstinātu tuberkulīna jutību. Tuberkulīna jutības pieaugumu nosaka, palielinot infiltrāta lielumu par 6 mm vai vairāk, salīdzinot ar iepriekšējo gadu.

4. Personas ar neskaidru tuberkulīna alerģijas etioloģiju - ja šajā laikā nav iespējams atrisināt jautājumu par pozitīvas reakcijas cēloni tuberkulīnam (pēc vakcīnas? Infekcijas?). Nav absolūtu kritēriju pēcvakcinācijas un infekcijas tuberkulīna alerģijas diferenciāldiagnozei. Bieži vien jautājums par reakcijas raksturu tiek atrisināts ar ftiziatriķi dinamiskā novērošanā. Papildus infiltrāta lielumam tiek ņemts vērā arī tās kvalitātes raksturlielumu novērtējums: krāsu intensitāte, kontūru skaidrība, pigmentācijas saglabāšanas periods pēc infiltrāta izzušanas.

5. Inficētas personas ar MBT, ja tām bija Mantoux tests ar 2 Tu PPD-L, tika veiktas neregulāri. Šajā grupā īpaša uzmanība jāpievērš bieži slimojamiem bērniem un pusaudžiem, kā arī tiem, kam ir līdzīgas slimības.

oSavlaicīga bērnu pārbaude no saskares ar pacientu tuberkuloze.

Liela uzmanība jāpievērš bērnu, kam ir Mycobacterium tuberculosis, infekcijas avota identificēšanai. Infekcijas veidi bērniem un pusaudžiem ir atkarīgi no infekcijas avota rakstura.

1. Aerogēns ceļš - saskare ar pacientu cilvēka tuberkuloze, īpaši bakteriolīze. Šajā gadījumā notiek infekcija.M. tuberkuloze.

2. Barības ceļš ir inficēta piena un termiski neapstrādātu piena produktu izmantošana no dzīvniekiem, kas cieš no tuberkulozes. M. infekcija notiek.bovis.

3. Kontakta ceļš - kad MBT iekļūst caur bojāto ādu un gļotādu, notiek šo orgānu primārais bojājums.

4. Transplacentālais ceļš ir reti. Svarīga loma ir placenta sakāvei - gan tuberkulozei, gan traumām dzemdību laikā. MBT iekļūst caur nabas vēnu auglim, galvenokārt iekļūst aknās, iespējams, ietekmējot portāla limfmezglus. Primārās bojājums var rasties plaušās un citos orgānos inficētas amnija šķidruma aspirācijas un norīšanas laikā.

Vairumā gadījumu bērni, īpaši agrīnās un pirmsskolas vecuma bērni, ir inficēti ar SDO ģimenē. Ģimenes apdeguma risks tuberkulozes infekcijai ir atkarīgs ne tikai no sēšanas daudzuma, bet arī no tā ilguma. Bērna uzņemšana no pirmajiem dzīves mēnešiem saskarē ar pacientu ar tuberkulozi vairumā gadījumu noved pie slimības attīstības. Parasti šajos gadījumos bērniem rodas vispārēji sarežģīti tuberkulozes veidi.

Ja ģimenē konstatē pacientu ar tuberkulozi, kontakts nekavējoties tiek atvienots. Bērns tiek nosūtīts apspriešanai fthisiatrician pārbaudei 7-10 dienu laikā (ODM). Bērniem vissvarīgākais profilakses pasākums ir novērst kontaktu ar pacientu ar tuberkulozi.

oPārbaude, risinot slimības simptomus.

Sākotnējās tuberkulozes izpausmes ir nepietiekamas: apetītes zudums, ķermeņa masa, nogurums, aizkaitināmība, reizēm temperatūra paaugstinās līdz subfebriliem skaitļiem utt.

Mazi bērni kļūst spoži, kaprīki, nemierīgi guļ. Bērniem no šīs vecuma grupas ir īpaši vērojama apetīte un svara zudums.

Pirmsskolas vecuma bērni ātri nogurst spēlēs, ir svīšana, reizēm - dispepsijas simptomi, sāpes vēderā.

Samazinās skolēnu sniegums, pasliktinās atmiņa un uzmanība. Bērni sūdzas par nogurumu, biežām galvassāpēm un dažreiz - straujām sāpēm muskuļos un locītavās.

Intoksikācijas simptomi atspoguļo nervu sistēmas traucējumus, ko izraisa toksiska iedarbība uz Mycobacterium tuberculosis nervu sistēmu.

Temperatūras izmaiņas bērniem ar tuberkulozi ir ļoti dažādas. Visbiežāk viņa ir tikai zemas kvalitātes. Tajā pašā laikā var rasties aktīva tuberkuloze ar normālu vai drudzīgu temperatūru. Dažreiz ir ievērojamas temperatūras svārstības no rīta un vakarā.

Klepus rodas sarežģītā tuberkulozē bērniem. Slimības sākumā klepus nav galvenais simptoms.

Pacientiem ar kopējām formām un sarežģītu tuberkulozes gaitu novēro slimības spilgtas klīniskās izpausmes. Bet nav tuberkulozes patognomonisko klīnisko simptomu. Tāpēc savlaicīga tuberkulozes procesa diagnostika ir iespējama tikai ar visaptverošu anamnētisko datu, objektīvu pētījumu datu, tuberkulīna diagnozes, instrumentālo un laboratorijas pētījumu metožu novērtējumu.

oProfilaktiskā fluorogrāfijas pārbaude.

Preventīvās fluorogrāfiskās medicīniskās pārbaudes veic pusaudži vecumā no 15 līdz 17 gadiem. Tā kā nav datu par profilakses pārbaudēm šajos vecumos, tiek veikta ārkārtas fluorogrāfiskā pārbaude.

Ja fotofluorogrammā ir konstatētas izmaiņas, pacientu rūpīgi pārbauda ftisiologs. Lai to izdarītu, izmantojiet obligāto diagnostikas minimumu (ODM).

Tuberkulozes kursa iezīmes maziem bērniem

ko nosaka bērna ķermeņa reaktivitāte un rezistence, kā arī tās anatomiskās un fizioloģiskās īpašības.

Dabiskās pretestības mehānismi   jaundzimušajam bērnam ir fizioloģisks trūkums. Jaundzimušie atzīmēti:

- zema leikocītu aktivitāte;

Zema mononukleāro šūnu un leikocītu migrācijas aktivitāte. Tā iemesls ir samazināts serotehnisko faktoru veidošanās un pastiprināts inhibējošā faktora atbrīvošanās no asins limfocītiem. Šie faktori ir saistīti ar jaundzimušo ādas vieglo spēju veidot iekaisuma reakciju;

- fagocitozes absorbcijas fāze ir labi definēta, gremošanas fāze ievērojami atpaliek no absorbcijas fāzes;

- dabiskās pretestības humora faktoru trūkums. Dabiskās rezistences humorālie faktori (komplementa, lizocīma, pareizs uc) izraisa mikobaktēriju ekstracelulāru iznīcināšanu. Komplekta galveno komponentu (C3 un C5) trūkums veicina nepietiekamu ķīmotaktisko faktoru veidošanos serumā un nepietiekamu baktericīdu aktivitāti. Lizocīma īpašība ir baktēriju lizēšana. Tā līmenis jaundzimušo serumā ir augstāks nekā pieaugušajiem, bet pēc 7 dienām tas samazinās līdz līmenim mātes serumā. Pareiza baktericīda aktivitāte izpaužas tikai kombinācijā ar komplementu un magnija joniem.

Nespecifiskiem aizsargfaktoriem ir galvenā aizsargājošā loma līdz specifisku imūnsistēmu nogatavināšanas periodam.

Imunoloģiskās reaktivitātes veidošanās   bērna ķermenis notiek dažādos laikos:

- limfocītu T un B sistēmu funkcionālo nenobriedumu. T-limfocītu darbība sākas auglim līdz 9-15 nedēļām, bet aizkavētas hipersensitivitātes reakcijas sasniedz pilnīgu attīstību līdz 1. dzīves gada beigām. Tādējādi augļa un jaundzimušā T-limfocīti nav pietiekami funkcionāli nobrieduši. B-limfocītu skaits jaundzimušajiem ir tuvu vērtībai pieaugušajiem, bet antivielu ražošana ir minimāla vai nav. B-limfocītu darbība sākas un turpina uzlaboties pēcdzemdību periodā. Kad intrauterīna infekcija notiek izglītībāIgm   augļa šūnām. Jaundzimušo serumā trūkstIgA tā daudzums palielinās līdz 1 gada beigām un sasniedz pieaugušo līmeni tikai līdz 8-15 gadu vecumam.Igg   jaundzimušajam bērnam ir mātes, un pirmajos sešos bērna dzīves mēnešos notiek katabolisms un līmeņa pazemināšanās.Igg   parādās tikai bērna dzīves 6. nedēļā un tā skaits palielinās par 5-15 gadu vecumu. Tādējādi jaundzimušais bērns nespēj veikt pilnvērtīgu specifisku humorālu reakciju.

Jaundzimušajam ir trūkums limfocītu T- un B-sistēmu funkcijās, kas ir nespecifiskās rezistences samazināšanās. Šiem faktoriem ir nozīme tuberkulozes imunitātes mehānismu veidošanā. Tuberkulozes infekcija, savukārt, ar slimības attīstību maina imūnsistēmas darbību.

Priekšlaicīgi dzimušiem zīdaiņiem ir ievērojams dabisko pretestības faktoru trūkums. Pirmsdzemdību imūndeficīts ir ilgs un ilgst līdz 5 gadiem.

Nelabvēlīgo tuberkulozes infekcijas gaitu veicina mazu bērnu elpošanas orgānu īpatnības, jo anatomiskā un fizioloģiskā struktūra:

- gaisa vadīšanas sistēmas relatīvais šaurums, mazs izmērs un nepietiekama funkcionālā diferenciācija noved pie sliktas ventilācijas un veicina mikroorganismu nogulsnēšanos;

- limfātiskās sistēmas pazīmes;

- nepietiekams gļotādu skaits bronhu gļotādā, kas izraisa tā relatīvo sausumu un sarežģī svešu vielu, tostarp mikroorganismu, evakuāciju;

- acīni ir primitīva struktūra, slikta elastīgās šķiedras, kas samazina gaisa plūsmas ātrumu un dod priekšroku mikroorganismu nosēdināšanai;

- nepietiekams virsmaktīvās vielas daudzums rada apstākļus specifisku un nespecifisku plaušu iekaisuma izmaiņu attīstībai, veicina atelektāzes attīstību;

Šo pazīmju sekas maziem bērniem ir masveida limfātisko audu bojājums, tendence vispārināt tuberkulozes procesu, tendence uz gadījuma nekrozi skartajos orgānos.

Tuberkulozes kursa pazīmes pusaudža gados   nosaka:

- paaugstināta vielmaiņas procesu aktivitāte, kas noved pie izteikta tuberkulozes procesa morfoloģiskā un klīniskā gaita;

- atsevišķu orgānu un sistēmu nevienmērīga nogatavināšana, kas var noteikt bojājuma lokalizācijas selektivitāti;

- strauja neuroendokrīnās sistēmas attīstība un pārstrukturēšana: pusaudžiem vairojas vairogdziedzera un dzimumdziedzeru funkcija, ierosmes un inhibīcijas procesu attiecība. nervu sistēma   (ierosmes procesa pārsvars).

Šie faktori ietekmē pusaudža ķermeņa aizsardzības un adaptīvās spējas, imunoloģisko, iekaisuma reakciju un reģenerācijas gaitu, un līdz ar to arī slimības klīniskās izpausmes un rezultātus.

Pacientiem ar tuberkulozi vispārējās asins analīzes izmaiņas nav patognomoniskas. Ar ierobežotiem un neaktīviem tuberkulozes veidiem, parastajam numuram ir raksturīga eritrocītu hipohromija. Ar masveida infiltrātiem vai kazeozu pneimoniju, plaši izplatītu kaulu limfadenītu, ir konstatēti specifiski zarnu bojājumi, kā arī liela plaušu vai pēcoperācijas asiņošana, eritropēnija un mikrocitoze, oligohromasija, polihromasija. Makrocitoze, un vēl jo vairāk, poikilocitoze ir daudz retāka, parasti ar smagu anēmiju. Retikulocītu skaits ar kompensētu tuberkulozes stadiju svārstās no 0,1 līdz 0,6% ar subkompensētu, no 0,6 līdz 1,0% un 1% retikulocītu ir raksturīgi dekompensētiem.

Tuberkulozes gadījumā var novērot mērenu leikocitozi (līdz 15 tūkstošiem leikocītu), retāk leikopēniju, kas notiek 2-7% gadījumu pacientiem ar ierobežotu un viegli ārstējamu procesu formu un 12,5% - ar destruktīvu un progresējošu plaušu tuberkulozi. .

Visbiežāk notiek izmaiņas leikocītu formā. Gan relatīvā, gan absolūtā neitrofīlija, mērena leikocītu nobīde pa kreisi līdz promielocītiem. Meliocīti ir ļoti reti sastopami nekomplicētu tuberkulozes gadījumā. Neitrofilu ar patoloģisku smilšu skaita pieaugums pacienta, kam ir tuberkuloze, hemogrammā vienmēr norāda procesa ilgumu: pacientiem ar smagu tuberkulozi gandrīz visi neitrofili satur patoloģisku smilšu. Kad tuberkulozes uzliesmojums izzūd, kodolieroču maiņa nonāk normāli salīdzinoši ātri. Neitrofilu nenormāla granularitāte parasti ilgst ilgāk nekā citas izmaiņas hemogrammā.

Lielākā daļa primārās tuberkulozes formas ir saistīta ar limfopēniju, ko dažkārt novēro pat vairākus gadus pat pēc īpašām izmaiņām. Sekundārā tuberkuloze akūtajā fāzē atkarībā no procesa smaguma var būt saistīta ar normālu limfocītu skaitu vai limfopēniju.

No tuberkulozes procesa novērtēšanas testiem īpaša vieta ir eritrocītu sedimentācijas ātruma (ESR) noteikšana, kas ir svarīga tuberkulozes procesa gaitas novērtēšanai un tās aktīvo formu noteikšanai. ESR pieaugums liecina par patoloģiska procesa (infekcijas-iekaisuma, strutainas, septiskas, hemoblastozes, Hodžkina slimības uc) klātbūtni un kalpo par tās smaguma rādītāju, tomēr parastie ESR indikatori ne vienmēr norāda uz patoloģijas trūkumu. Eritrocītu nogulsnēšanos paātrina globulīnu, fibrinogēna, holesterīna un asins viskozitātes samazināšanās asinīs. Eritrocītu sedimentācijas palēnināšanās ir raksturīga apstākļiem, kam seko hemoconcentrācija, albumīna un žultsskābes satura palielināšanās.

Hemogramma pacientiem ar tuberkulozi ārstēšanas laikā mainās. Hematoloģiskās izmaiņas izzūd ātrāk, jo veiksmīgāka ir terapeitiskā iejaukšanās. Tomēr jāņem vērā dažādu antibakteriālo zāļu ietekme uz asinsradi. Viņi bieži izraisa eozinofiliju, dažos gadījumos - leikocitozi un biežāk leikopēniju līdz agranulocitozei un limfoid-retikulārai reakcijai. Sistemātiska hematoloģiskā kontrole un iegūto datu pareiza analīze ir būtiski, lai novērtētu pacienta klīnisko stāvokli, procesa dinamiku un pielietotās ārstēšanas efektivitāti.

Urīna analīze

Urīnceļu tuberkulozes gadījumā urīna testēšana ir galvenā laboratorijas diagnostikas metode. Var novērot leikocitūriju, eritrocitūriju, proteinūriju, hipoisostūriju, tuberkulozi mikobaktēriju, nespecifisku bakteriūriju.

Leukocitūrija ir visizplatītākais urīnceļu sistēmas tuberkulozes simptoms pirms specifiskas ķīmijterapijas, un tas nav pieejams tikai izņēmuma gadījumos, piemēram, ar urētera lūmena pilnīgu iznīcināšanu. Nechiporenko tests (leikocītu skaita noteikšana 1 ml urīna) palīdz objektīvāk novērtēt leikocitūrijas pakāpi nefrotuberkulozē un dažos gadījumos to identificēt normālā urīna analīzē. Tomēr jāatceras, ka leikocitūrija var būt akūta un hroniska pielonefrīts, cistīts, uretrīts, akmeņi nierēs un urīnceļos.

Eritrocitūrija. kā leikocitūrija. Tā tiek uzskatīta par vienu no visbiežāk sastopamām urīnizvadkanāla tuberkulozes laboratoriskajām pazīmēm. Hematūrijas biežums ir atkarīgs no procesa izplatības, tas palielinās līdz ar destruktīvas tuberkulozes procesa attīstību nierēs. Eritrocitūrija bez leikocitūrijas ir raksturīgāka nieru tuberkulozes agrīnajām stadijām. Hematūrija, kas dominē pār leikocitūriju, ir svarīgs arguments par labu nieru tuberkulozei tās diferencēšanā ar nespecifisku pielonefrītu.

Bioķīmiskā asins analīze

Tuberkulozes gadījumā dažu bioķīmisko parametru izmaiņas galvenokārt ir atkarīgas no procesa fāzes, komplikācijām un dažādām līdzīgām slimībām. Pacientiem ar neaktīvu plaušu un citu orgānu tuberkulozi asins seruma kopējā olbaltumvielu un olbaltumvielu frakcija nemainās un nosaka to normālu saturu.

Akūtās slimības formās, kā arī hronisku tuberkulozes formu saasināšanā un progresēšanā albumīna globulīna koeficients samazinās.

Lai novērtētu tuberkulozes un tās komplikāciju funkcionālo stāvokli un aknu organisko bojājumu, būtiska ir tiešā un kopējā bilirubīna, aspartāta aminotransferāzes (ACT), alanīna aminotransferāzes (ALT) noteikšana serumā. Aminotransferāžu līmeņa dinamiskā noteikšana. bilirubīns pacientu ar tuberkulozi ārstēšanā, īpaši tās smagajās formās, ir obligāta sastāvdaļa tuberkulozes pacientu bioķīmiskajā pārbaudē un tiek veikta katru mēnesi.

Nieru funkcionālā stāvokļa novērtējums ietver seruma kreatinīna noteikšanu un glomerulārās filtrācijas ātruma aprēķināšanu, izmantojot Cockroft-Gault formulu. Glomerulārās filtrācijas ātruma aprēķināšana, izmantojot Reberg testu, dod mazāk precīzus rezultātus.

Galvenais mērķis dinamisko bioķīmisko pētījumu veikšanai pacientiem ar tuberkulozi ir kontrolēt procesa gaitu, savlaicīgi identificēt zāļu blakusparādības un atbilstošu homeostāzes traucējumu korekciju.

Bioķīmisko pētījumu metožu izmantošana ekstrapulmonālajā tuberkulozē

Informatīvākais rādītājs ņem vērā tuberkulostearīnskābes saturu bioloģiskajos šķidrumos, bet tā definīcija ir saistīta ar tehniskām grūtībām (nepieciešamību izmantot gāzes hromatogrāfiju un masas spektrometriju).

Daudzsološs ir izmērīt adenozīna deamināzes - fermenta, kas tiek konstatēts šķidrumos: sinoviālā, perikarda, ascitiskā vai cerebrospinālā - aktivitāti. Galvenie adenozīna dinazāzes ražotāji ir limfocīti un monocīti. Adenozīna deamināzes aktivitātes noteikšana bioloģiskajos šķidrumos atvieglo tuberkulozes sinovīta, limfmezglu tuberkulozes, tuberkuloza meningīta, tuberkulozes serozīta diagnozi.

Daži bioķīmiskie parametri to specifiskuma dēļ tiek noteikti tikai bioloģiskajos šķidrumos, kas atrodas tuvu bojājumam. Rādītāju līmeni mēra, reaģējot uz subkutānu vai intrakutālu tuberkulīna ievadīšanu (parasti pirms ievadīšanas un 48 un 72 stundas pēc tās). Pēc tam tiek aprēķināts marķiera līmeņa pieauguma līmenis (%) attiecībā pret sākotnējo līmeni.

Optimāls orgānu specifiskā enzīma transamidināzes aktivitātes noteikšana urīnā, kura izskats tiek konstatēts ar dažāda veida nieru bojājumiem. Transaminidāzes pētījums ir pamatots tikai tuberkulīna subkutānas ievadīšanas apstākļos, lai pastiprinātu lokālo iekaisuma procesu. Transamidināzes aktivitāte urīnā tiek noteikta sākumā un 24-72 stundas pēc 50 TE tuberkulīna ievadīšanas. Fermenturijas palielināšanās par 2 un vairāk reizes ļauj 82% gadījumu diferencēt nieru aktīvo tuberkulozi no hroniskas pielonefrīta saasināšanās.

Sieviešu dzimumorgānu tuberkulozē haptoglobīna un malondialdehīda koncentrācija asinīs tiek noteikta provokatīvā tuberkulīna testā. Tuberkulīnu ievada subkutāni ar devu 50 TE, un pēc 72 stundām veic atkārtotu bioķīmisko pētījumu. Tuberkulozes etioloģijas gadījumā haptoglobīna līmeņa paaugstināšanās pakāpe ir vismaz 28% un malondialdehīda līmenis - 39% vai vairāk. Tiek izmantota arī adenozīna deamināzes aktivitātes definīcija peritonālajā šķidrumā, kas iegūts no Douglas telpas. Punktu atkārtoti pārbauda 72 stundas pēc tuberkulīna intradermālas ievadīšanas 0,1 TE un 0,01 TE devās iekšējo dzimumorgānu projekcijas zonā uz priekšējās vēdera sienas. Par labu tuberkulozes procesam pierādījums ir adenozīna deamināzes aktivitātes palielināšanai par 10% vai vairāk, salīdzinot ar sākotnējo.

Ar acu bojājumiem tiek pārbaudīta fokusa reakcija, kas rodas acī, reaģējot uz antigēnu stimulāciju. Tajā pašā laikā nevēlamas izteiktas reakcijas attīstība kopā ar vizuālo funkciju samazināšanos. Tā kā minimālo fokusa reakciju novērtēšana bieži ir sarežģīta, lai objektīvi novērtētu secinājumu, ieteicams paralēli koncentrēties uz haptoglobīna vai adenozīna deamināzes pieauguma pakāpi.

Visi bioķīmiskie pētījumi jāveic kopā ar citām metodēm.

Asins koagulācijas tests

Asins koagulācijas sistēmas stāvokļa pētījuma nozīmīgums fhtisioloģijā ir saistīts ar hemorāģiju vai plaušu asiņošanu klīniskajos tuberkulozes slimnieku skaitā, kā arī hemocoagulācijas komplikācijām tuberkulozes ķirurģiskajā ārstēšanā. Turklāt latentā intravaskulārā hemocoagulācija, kas dabiski ir vienlaikus ar tuberkulozi, ietekmē slimības gaitu un ķīmijterapijas efektivitāti.

Pacientiem ar plaušu tuberkulozi, kurā dominē iekaisuma eksudatīvā komponente, novēro asins antikoagulanta aktivitātes samazināšanos. Pacientiem ar nelielu specifisku bojājumu izplatību plaušās ar iekaisuma produktīvās sastāvdaļas pārsvaru, intravaskulārā hemocoagulācija nav ļoti izteikta. Pacientiem ar plaušu tuberkulozi ar hemoptīzi un plaušu asinsizplūdumiem asins koagulācijas sistēma ir atšķirīga: pacientiem ar nelielu asins zudumu hemoptoe augstumā vai tūlīt pēc tās izbeigšanās novēro strauju asins koagulācijas pieaugumu sakarā ar izteiktu trombīna veidošanās procesu pastiprināšanos, vienlaikus saglabājot paaugstinātu strukturālo asins tūsku. Pacientiem ar masveida asins zudumu novērota koagulācijas potenciāla samazināšanās fibrinogēna koncentrācijas samazināšanās dēļ. XIII faktora aktivitāte, trombocītu skaits. Ķirurģiskās ārstēšanas stadijā pacientiem ar ierobežotām plaušu tuberkulozes formām nav nozīmīgu traucējumu ar homeostāzes sistēmu. Pacientiem ar kopīgiem procesiem, veicot pneimonīmu vai pleuropneumonektomiju, bieži rodas DIC, kas var būt „otrās slimības” forma.

Lai kontrolētu asins koagulācijas sistēmas stāvokli pacientiem ar plaušu tuberkulozi, nepieciešams noteikt aktivēto daļējo tromboplastīna laiku (APTT), fibrinogēnu, trombīna laiku, protrombīna indeksu, kā arī asiņošanas laiku un asinsreces laiku.

Hormonālie pētījumi

Mūsdienu eksperimentālie un klīniskie novērojumi liecina par specifiskas plaušu pneimonijas hormonālās stadijas izmaiņām. Pierādīts, ka hipofīzes-virsnieru, hipofīzes-vairogdziedzera sistēmu un aizkuņģa dziedzera funkcijas disfunkcijas korekcija saistībā ar anti-tuberkulozes terapiju veicina fibrogēzes procesu aktivizēšanu un remontu specifiskā iekaisuma centrā.

Hipofīzes-vairogdziedzera sistēmas funkcionālo stāvokli nosaka pēc trijodironīna (T 3), tiroksīna (T 4), vairogdziedzera stimulējošā hipofīzes hormona (TSH) satura. Ir konstatēts, ka 38–45% pacientu ar plaušu tuberkulozi tiek konstatēta subklīniska hipotireoze, un visbiežāk tā ir diagnosticēta izplatītajos un fibro-dobos procesos. Ar šīm pašām formām gan T3, gan T4 līmeņi ir visstraujāk samazināti, un šo hormonu nelīdzsvarotība rodas, palielinot attiecību T 4 / T h.

Virsnieru garozas funkciju novērtē ar kortizola līmeni asins serumā un aizkuņģa dziedzera endokrīno funkciju pēc imūnreaktīvā insulīna koncentrācijas. Infekcijas slimības akūtajā fāzē palielinās endogēnā kortizola un insulīna nepieciešamība. Hiperinsulinēmija norāda arī uz ķermeņa audu insulīna rezistenci, kas ir raksturīga jebkuram aktīvam iekaisuma procesam, īpaši specifiskam. Ar aknu plaušu tuberkulozi saistītu virsnieru dziedzeru glikokortikoīdu funkcijas noteikšana vairumā pacientu atklāj hiperkorticisma klātbūtni. Parastie kortizola koncentrācijas rādītāji pacientiem ar infekciozu iekaisumu akūtā periodā ir jāuzskata par virsnieru garozas glikokortikoīdu funkcijas relatīvo nepietiekamību, kas var kalpot par pamatu aizstājterapijai ar atbilstošām glikokortikoīdu devām.

Gandrīz trešdaļu pacientu ar plaušu tuberkulozi var konstatēt, ka viņu insulīna līmenis ir diezgan zems un tuvojas normas zemākajai robežai, savukārt 13-20% ir nozīmīgs hiperinsulinisms. Gan relatīvais hipo, gan hiperinsulinisms ir augsti riska faktori, kas rada dažāda smaguma ogļhidrātu vielmaiņas traucējumu attīstību. Šīs aizkuņģa dziedzera B šūnu funkcionālās aktivitātes izmaiņas prasa regulāru glikēmijas kontroli pacientiem ar tuberkulozi un savlaicīgu diabēta profilaksi. Turklāt. tas kalpo kā papildu pamatojums insulīna fizioloģisko devu izmantošanai kompleksajā tuberkulozes terapijā.

Kopumā vairogdziedzera hormonu līmeņa samazināšanās, to nelīdzsvarotība, hipercortisolēmija un hiperinsulinisms ir visizteiktākie pacientiem ar smagu tuberkulozi, ar plašu plaušu bojājumu un smagiem tuberkulozes intoksikācijas simptomiem.

Tuberkulozes mikrobioloģiskā diagnoze

Mikrobioloģiskie pētījumi ir nepieciešami, lai identificētu pacientus ar tuberkulozi, pārbaudītu diagnozi, pārraudzītu un koriģētu ķīmijterapiju, novērtētu ārstēšanas rezultātus, citiem vārdiem sakot, no pacienta reģistrācijas ar tuberkulozi līdz izņemšanai no reģistra.

Visas epidemioloģiskās programmas un projekti ir balstīti uz aprēķināto baktēriju ekskrementu skaitu, ko nevar izdarīt, neizmantojot laboratorijas metodes mikobaktēriju tuberkulozes noteikšanai. Pārbaudot tā saukto neorganizēto iedzīvotāju apgrozāmību, baktēriju izdalīšanās procentuālais daudzums sasniedz 70 vai vairāk, kas padara laboratorijas metodes par diezgan efektīvu līdzekli, lai identificētu šīs grupas pacientus ar tuberkulozi.

Tradicionālās mikrobioloģiskās metodes tuberkulozes diagnostikai - bakterioskopiskas un kultūras studijas. Mūsdienu metodēs tiek apsvērta mikobaktēriju tuberkulozes audzēšana automatizētās sistēmās, PCR. Tomēr visas šīs metodes noteikti ir apvienotas ar klasiskajām bakterioloģiskajām metodēm.

Diagnostikas materiālu vākšana

Laboratorijas testu efektivitāte lielā mērā ir atkarīga no diagnostiskā materiāla kvalitātes. Diagnostikas materiāla savākšanas, uzglabāšanas un transportēšanas noteikumu ievērošana un pacientu izmeklēšanas algoritma precīza izpilde tieši ietekmē rezultātu un nodrošina bioloģisko drošību.

Tuberkulozes pētījumiem, izmantojot dažādus materiālus. Sakarā ar to, ka plaušu tuberkuloze ir visbiežāk sastopamais tuberkulozes bojājumu veids, krūts un citi tracheobronhijas koku sekrēciju veidi tiek uzskatīti par galvenajiem pētījuma materiāliem: augšējo elpceļu izvadīšana pēc aerosola ieelpošanas: bronhu skalošanas ūdens; bronhokalveolārie skalošanas līdzekļi; materiāls, ko iegūst, izmantojot bronhoskopiju, transtrāzi un intrapulmonālo biopsiju: ​​aspirēt no bronhiem, balsenes uztriepēm, eksudātiem, smērēm no brūcēm utt.

Pētījumu efektivitāte palielinās, ja viņi veic kontrolētu materiālu savākšanu no pacienta. Lai to izdarītu, piešķiriet speciāli aprīkotu telpu vai iegādājieties īpašas kajītes. Materiālu vākšana ir bīstama procedūra, tāpēc jums ir nepieciešams savākt materiālus pētniecībai, ievērojot infekcijas drošības noteikumus.

Mikrobakteriju tuberkulozes izpētes materiāls tiek savākts sterilos flakonos ar cieši aizskrūvētiem vāciņiem, lai novērstu vides piesārņojumu un aizsargātu savākto materiālu no piesārņojuma.

Flakoniem diagnostikas materiāla savākšanai jāatbilst šādām prasībām:

• jābūt izgatavotiem no triecienizturīga materiāla;
• vajadzētu viegli izkausēt, autoklāvējot;
• jābūt pietiekamam tilpumam (40-50 ml):
• ir plaša krēpu atvērums (diametrs nav mazāks par 30 mm);
• jābūt viegli lietojamiem, caurspīdīgiem vai caurspīdīgiem, lai jūs varētu novērtēt savāktā parauga daudzumu un kvalitāti, neatverot vāku.

Lai iegūtu optimālus pētījumu rezultātus, jāievēro šādi nosacījumi:

• materiālu savākšana notiek pirms ķīmijterapijas sākuma;
• pētījuma materiāls jāsavāc pirms pārtikas un narkotiku uzņemšanas no rīta;
• pētījumiem ir vēlams savākt vismaz trīs rīta krēpu paraugus. Savākt krēpu 3 dienas pēc kārtas;
• savāktais materiāls jāpiegādā laboratorijā pēc iespējas ātrāk:
• ja nav iespējams nekavējoties nogādāt materiālu uz laboratoriju, to uzglabā ledusskapī 4 ° C gaisa temperatūrā ne ilgāk kā 48 stundas;
• transportējot materiālu, rūpīgi jāuzrauga flakonu integritāte.

Pareizi savāktajam krēpam ir gļotādas vai mucopurulents raksturs. Izpētītās krēpu daļas optimālais tilpums ir 3-5 ml.

Flegma tiek savākta ārsta uzraudzībā. Personas, kas atbildīgas par krēpu vākšanu, ir jāpārrauga dažu noteikumu īstenošana:

• jums jāpaskaidro pacientam pētījuma mērķis un nepieciešamība klepus ne siekalām vai deguna gļotādām, bet dziļo elpceļu saturs. To var panākt, pateicoties produktīvam klepus, kas rodas pēc dažām (2-3) dziļa elpām. Ir arī jābrīdina pacients, ka viņam vispirms jāizskalo muti ar vārītu ūdeni, lai noņemtu galveno mutes dobuma mikrofloras daļu un pārtikas gruvešus, kas kavē krēpu izpēti;
• medicīniskajam darbiniekam, kas iesaistīts krēpu savākšanā, papildus drēbēm un vāciņam jāvalkā maska, gumijas cimdi un gumijas priekšauts;
• stāvot aiz pacienta, viņam ir ieteicams glabāt pudeli pēc iespējas tuvāk lūpām un nekavējoties sadalīt krēpu tajā, kamēr tas klepus, bet ir nepieciešams nodrošināt, lai gaisa plūsma tiktu novirzīta no veselības aprūpes sniedzēja:
• pēc krēpu savākšanas pabeigšanas ārstam ir rūpīgi jāaizver flakons ar vāciņu un jānovērtē savākto krēpu daudzums un kvalitāte. Tad pudele tiek marķēta un ievietota speciālā biksā transportēšanai uz laboratoriju.

Ja pacients neizdala krēpu, tad nakts pirms un agri no rīta materiāla savākšanas dienā jādod atkrēpošanas līdzeklis: Altea zāļu saknes ekstrakts (mukaltīns), bromheksīns, ambroksols uc - vai uzlikt kairinošu ieelpojumu, izmantojot iekārta, kas uzstādīta savākšanas telpā. krēpas Šādā veidā savāktie materiāli nevar tikt saglabāti un jāpārbauda savākšanas dienā. Lai izvairītos no viņa "noraidīšanas" laboratorijā virzienā, būtu jāizveido īpaša zīme.

Ja šajā iestādē neveic mikrobioloģiskos pētījumus, savākto diagnostikas materiālu centralizēti nogādā laboratorijā, ja materiāls ir obligāti jāsaglabā starp piegādēm ledusskapī vai ar konservantiem. Materiāls tiek nogādāts laboratorijā transporta kastēs, kuras var viegli dezinficēt. Katram paraugam jābūt marķētam ar atbilstošu etiķeti, un visa partija jāaizpilda kopā ar pievienoto veidlapu.

Pacientu izmeklēšanas veidi un biežums

Sākotnējā, tā sauktās diagnostikas, pacienta tuberkulozes izmeklēšanas laikā ir jāpārbauda vismaz 3 poras poru 2 vai 3 dienu laikā. apkopoti medicīnas darbinieku uzraudzībā, kas palielina mikroskopijas efektivitāti.

Primāro tuberkulozes skrīningu veic visas veselības sistēmas medicīniskās diagnostikas iestādes. Nesen, lai palielinātu primārās pārbaudes efektivitāti, ir izveidoti tā saucamie mikroskopijas centri, kas balstīti uz klīniskās diagnostikas laboratorijām un aprīkoti ar moderniem mikroskopiem un aprīkojumu epidēmijas drošības nodrošināšanai.

TB objektos tiek izmantots skrīninga grafiks, kas ietver krēpu vai citu diagnostikas materiālu izpēti vismaz 3 reizes 3 dienu laikā. Ārstēšanas procesā mikrobioloģiskie pētījumi tiek veikti regulāri vismaz reizi mēnesī intensīvas ķīmijterapijas fāzē. Pārejot uz turpmāko posmu, pētījumi tiek veikti retāk - ar 2-3 mēnešu intervālu, bet pētījumu daudzveidība ir samazināta līdz diviem.

Diagnostiskā materiāla savākšanas iezīmes ekstrapulmonālajā tuberkulozē

Patoloģiskā materiāla īpatnība tuberkulozes ekstrapulmonārajās formās ir neliela mikobaktēriju tuberkulozes koncentrācija tajā, kas prasa jutīgākas mikrobioloģiskās izpētes metodes, pirmkārt, metodes barošanas vidē.

Urogenitālās tuberkulozes gadījumā urīns ir vispieejamākais pētniecības materiāls. Urīna paraugu ņemšanu veic apmācīta medmāsa.

Ārējās dzimumorgānus mazgā ar ziepēm un ūdeni vai vāju kālija permanganāta šķīdumu. Uzmanīgi apstrādājiet urīnizvadkanāla ārējo atvērumu. Vidēja daļa no rīta urīna tiek savākta sterilā flakonā: vīriešiem - protams, sievietēm - ar katetru. Urīns no nieru iegurņa tiek savākts sterilās caurulēs, lai kateterizētu vienu vai divas nieres, pēdējā gadījumā - vienmēr atsevišķi no katras nieres. Neliels daudzums šīs urīna tiek centrifugēts, nogulsnes pārbauda.

Vīriešiem spermu, sēklinieku punkcijas, prostatas izdalījumus centrifugē, lai iegūtu nogulsnes. Jebkurā specifiskā procesa lokalizācijā vīriešu dzimumorgānā prostatas dziedzeru masāža var veicināt tuberkulozes mikobaktēriju sekrēciju sekrēciju.

Vīriešu menstruālā asinis tiek savāktas sūknējot vai izmantojot Kafka vāciņu. Iegūto materiālu atbrīvo no sarkanajām asins šūnām, mazgājot to ar destilētu ūdeni, kam seko centrifugēšana. Granulu pārbauda.

Izvadīšana no dzemdes kakla kanāla tiek savākta jebkurā Kafkas tvertnē vai vāciņā, tas ir, vēlams uzkrāt 1-2 ml patoloģiska materiāla.

Materiāls, kas iegūts operācijas laikā uz nierēm, dzimumorgāniem. biopsijas, skrāpējumi no endometrija, homogenizēti. Lai to izdarītu, to ievieto sterilā javas un rūpīgi sasmalcina ar sterilām šķērēm. Iegūtajai suspensijai pievieno sterilu upes smilšu daudzumu, kas ir vienāds ar tā masu, pēc tam pievieno 0,5-1,0 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, un viss tiek sasmalcināts, veidojot pastas masu, pievienojot izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu (4-5 ml). Tad masai ļauj nokristies 1-1,5 minūtes, pārbauda supernatantu.

Kaulu un locītavu tuberkuloze. Punktu (abscesu abscesu pūce), kas iegūta ar sterilu šļirci, ievieto sterilā traukā un nekavējoties nogādā laboratorijā. Sterils pipete, kas iepriekš samitrināta ar sterilu izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, ieņem 2-5 ml strutas, pārnes to uz pudelēm ar pērlītēm un pievieno vēl 2-3 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma. Pudelīte tiek aizvērta ar aizbāzni un joks aparātā krata 8-10 minūtes. Pārbauda homogenizēto suspensiju.

Par osteo-locītavu tuberkulozes fistulālajām formām no fistulas tiek ņemts strutas. Liela izlāde tiek savākta tieši mēģenē. Nepietiekamas izplūdes gadījumos fistulas gājiens tiek nomazgāts ar sterilu izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, un testa ūdenī savāktie mazgāšanas ūdeņi vai tampona gabals, kas iemērkts strūklā, tiek nosūtīti pārbaudei.

Ķirurģiskie materiāli, kas iegūti operācijas laikā uz kauliem un locītavām, var sastāvēt no strutainām nekrotiskām masām, granulācijām, rētām, kaulu audiem, sinovialo membrānu audiem un citiem substrātiem. To apstrādā kā nieru tuberkulozi.

Sintētiskā šķidruma mikrobioloģiskā pārbaude 3% nātrija citrāta šķīdumā (attiecība 1: 1), lai novērstu recēšanu, tiek veikta tieši pēc punkcijas.

Limfmezglu tuberkuloze. Tika pārbaudīta arī limfmezglu punkcijas laikā iegūta strūkla. kā zarnu abscesu pūce. Limfmezglu audus, kas iegūti operācijas laikā, biopsijas, pārbauda tāpat kā ar citiem tuberkulozes veidiem.

Pētījums par mikobaktēriju tuberkulozes izkārnījumu masām ir ļoti reti, jo pozitīvie rezultāti gandrīz nav pilnīgi.

Mikroskopijas mikobaktērijas

Krēpu mikroskopija ir samērā ātra, vienkārša un lēta metode, kas jāizmanto visos iespējamos tuberkulozes gadījumos. Turklāt šis pētījums tiek veikts, lai novērtētu ķīmijterapijas efektivitāti un konstatētu atveseļošanos vai neveiksmīgu ārstēšanas rezultātu bez kultūras rezultātiem.

Izmantot divas mikroskopiskās pārbaudes metodes:

• tiešā mikroskopijas metode, kad uztriepes tiek gatavotas tieši no diagnostikas materiāla;
• nogulumu mikroskopijas metode, kas sagatavota no dekontaminēta materiāla kultūrai.

Pirmo metodi izmanto laboratorijās, kurās veic tikai mikroskopiskus izmeklējumus (vispārējās medicīnas tīkla klīniskās diagnostikas laboratorijas).

Labākos mikroskopiskos izmeklējuma rezultātus iegūst, koncentrējot diagnostisko materiālu (piemēram, centrifugējot).

Lai noteiktu mikobaktēriju tuberkulozi ar 50% mikroskopijas iespējamību, 1 ml krēpu satur vairāk nekā 5000 mikrobu šūnas. Pacientu flegma ar plaušu formas  Tuberkuloze parasti satur ievērojamu daudzumu skābju rezistentu baktēriju, kas ļauj droši noteikt tos mikroskopijas laikā. Šīs metodes diagnostisko jutīgumu var uzlabot, pārbaudot vairākus krēpu paraugus no viena pacienta. Negatīva bakterioskopija neizslēdz tuberkulozes diagnozi, jo dažu pacientu krēpās ir mazāk mikobaktēriju, nekā to var noteikt ar mikroskopu. Sliktas krēpu uztriepes sagatavošana var būt arī negatīvas bakterioskopiskas pārbaudes cēlonis.

Visbiežāk izmantotā metode skābju rezistentu mikobaktēriju noteikšanai uztriepēs ir krāsošana saskaņā ar Ziehl-Nelsen. Šī metode ir balstīta uz karbola fuksīna iekļūšanu mikrobu šūnā caur membrānu, kas ietver vaska lipīdu slāni, vienlaicīgi iedarbojoties uz karsēšanu un spēcīgu fenola kodināšanas efektu. Sekojoša uztriepes krāsas maiņa ar 25% sērskābes šķīdumu vai 3% sālsskābes spirtu izraisa visu ne-skābes izturīgu struktūru krāsas maiņu. Krāsu izlīdzinošie elementi tiek krāsoti ar 0,3% metilēnzilā šķīdumu. Mikobaktērijas neuzskata parastās anilīna krāsvielas, kā rezultātā skābju rezistentās mikobaktērijas ir krāsotas aveņu sarkanā krāsā, un citi mikrobi un šūnu elementi - zilā krāsā.

Zilu-Nelsenā iekrāsoto uztriepju pārbaudei tiek izmantots viegls binokulārais mikroskops ar iegremdēšanas mērķi (90 vai 100 reižu palielinājums) un okulārs ar 7 vai 10 reižu palielinājumu. Izpētīt 100 redzes laukus, kas ir pietiekami, lai identificētu uztriepju vienu mikobaktēriju. Ja šāda pētījuma rezultāts ir negatīvs, apstiprināšanai ieteicams apskatīt vēl 200 redzes laukus. Reģistrē rezultātus, norādot atklāto skābju rezistentu mikobaktēriju skaitu (CUM).

Papildus šai metodei luminiscences mikroskopijai tiek izmantoti fluorohromi, kas ļauj sasniegt labākos rezultātus. Šīs metodes izmantošana palielina mikroskopijas efektivitāti par 10-15%. Apstrādājot mikobaktēriju ar luminiscējošām krāsvielām (auramīnu, rodamīnu utt.), Šīs vielas ir saistītas arī ar vaska līdzīgām mikrobu šūnu struktūrām. Kad krāsota šūna tiek apstarota ar aizraujošu gaismas avotu (noteiktu ultravioletā starojuma spektru), tie sāk mirdzēt oranžu vai spilgti sarkanu gaismu uz melna vai tumši zaļa fona. Sakarā ar redzamā attēla lielo spilgtumu un kontrastu, jūs varat samazināt mikroskopa kopējo palielinājumu par 4-10 reizēm, kas paplašina redzes lauku un samazina preparāta skatīšanās laiku. Līdz ar to, pateicoties daudz lielākam lauka dziļumam, var palielināt pētījuma komfortu.

Lietojot fluorescences mikroskopu, ir nepieciešams daudz mazāk laika, lai aplūkotu to pašu uztriepes laukumu, nekā ar mikroskopiju, kas ir notraipīta ar Tsil-Nelsen. Ja darba dienas laikā mikroskopists izskata aptuveni 20-25 šādas uztriepes, tad izmantojot fluorescences mikroskopu, viņš var vienlaikus pārbaudīt vairāk nekā 60-80 paraugus. Pieredzējuši mikroskopi zina, ka šūnu krāsošana ar auramīna un rodamīna maisījumu kaut kādā veidā ir raksturīga skābju rezistentām mikobaktērijām, kas šajā gadījumā ir zelta stienīšu izskats. Saprofīti ir krāsaini zaļgani.

Vēl viena nozīmīga fluorescences mikroskopijas metodes priekšrocība ir spēja noteikt modificētas mikobaktērijas, kas zaudējušas vairākus nelabvēlīgus faktorus, īpaši intensīvu ķīmijterapiju, skābes rezistences īpašību un nav konstatētas šajā sakarā, kad tās ir iekrāsotas ar Tsil-Nelsen.

Fluorescences mikroskopijas trūkumi ietver salīdzinoši augstās mikroskopa izmaksas un tās darbību. Tomēr centralizētās vai citās lielās laboratorijās, kur slodze pārsniedz 3 tehniķu skaitu, kas strādā ar trim parastajiem mikroskopiem, ir lētāk izmantot vienu fluorescences mikroskopu.

Bakterioskopiskām metodēm ir samērā augsta specifitāte (89-100%). Aptuveni 97% pozitīvo rezultātu, kas iegūti ar jebkuru mikroskopijas metodi, nepārprotami apstiprina sēšanas rezultāti.

Jāatzīmē, ka patoloģiska materiāla uztriepes mikroskopiskā pārbaude nevar noteikt identificēto skābju rezistentu mikobaktēriju sugu. Mikroskopijas metode ļauj izteikt viedokli tikai par skābju rezistentu mikroorganismu klātbūtni vai neesamību preparātā, kas izskaidrojams ar to, ka ir liels skaits tuberkulozes ne-tuberkulozes skābju rezistentu mikroorganismu, kas ir morfoloģiski līdzīgi mikobaktērijām.

Puskvantitatīvās vienībās iegūto mikroskopijas rezultātu novērtējums.

Lai varētu salīdzināt dažādu mikroskopijas metožu rezultātus, tiek ieviesti empīriskie koeficienti. Piemēram, lai salīdzinātu ar fluorescējošām krāsām uzkrītošās uztriepes rezultātus ar gaismas mikroskopijas datiem (1000x palielinājums), ir nepieciešams sadalīt skābju rezistentu mikobaktēriju skaitu, kas konstatēts ar fluorescējošu mikroskopu, ar atbilstošo koeficientu, izmantojot 250 mikroskopa palielinājumu - 10, ar 450 reizes - 4, ar 630 reizes - pie 2.

Mikroskopijas iezīmes ekstrapulmonālajā tuberkulozē

Tiek veikta tieša mikroskopija, kā arī smērēšanas mikroskopija, kas sagatavota pēc bagātināšanas, kam seko Zill-Nelsen krāsošana vai luminiscences krāsvielas. Tiešā uztriepes mikroskopija ir neefektīva sakarā ar zemu mikobaktēriju koncentrāciju materiālā, un tāpēc ir racionālāk izmantot bagātināšanas metodes. Centrifugēšana ir visefektīvākā. Ja bioloģiskais materiāls ir viskozs, centrifugēšana tiek veikta ar vienlaicīgu homogenizāciju un materiāla sašķidrināšanu, kas tiek veikta, izmantojot ātrgaitas centrifūgas ar centrbēdzes spēku 3000 g un hipohlorīta šķīdumiem. Citas bioloģiskās bīstamības aerosolu veidošanās dēļ pašlaik netiek izmantotas citas bagātināšanas metodes, piemēram, mikrofotēšana.

Kultūras metode tuberkulozes diagnostikai

Sēšanas metode vai kultivēšanas metode ir jutīgāka nekā uztriepes mikroskopija, un tai ir vairākas priekšrocības salīdzinājumā ar pēdējo. Tas ļauj izpētīt vairākus desmitus dzīvotspējīgu mikobaktēriju pētītajā materiālā un tam ir liela diagnostiskā vērtība. Tas ir īpaši svarīgi, pētot materiālus no nesen diagnosticētiem vai ārstētiem pacientiem, kas izdalās nelielā daudzumā mikobaktēriju.

Salīdzinot ar mikroskopiju, kultūras pētījums var palielināt identificēto tuberkulozes pacientu skaitu par vairāk nekā 15-25%, kā arī pārbaudīt tuberkulozi agrākos posmos, kad slimība joprojām ir labi ārstējama. Ļoti svarīga kultūras pētījumu priekšrocība ir iespēja iegūt patogēna kultūru, kuru var identificēt un pētīt saistībā ar zāļu jutīgumu, virulenci un citām bioloģiskām īpašībām.

Audzēšanas metožu trūkumi ietver to ilgumu (materiālu gaidīšanas laiks sasniedz 10 nedēļas). augstākas izmaksas, diagnostikas materiālu apstrādes sarežģītība.

Diagnostiskā materiāla apstrādes principi

Tradicionālās mikrobioloģiskās metodes nevar izmantot tuberkulozes pētījumos. Tas ir saistīts ar faktu. ka mikobaktēriju tuberkuloze aug ļoti lēni, un lielākā daļa klīnisko materiālu paraugu satur strauji augošus pirogēnus un putekļainus mikroorganismus, sēnītes. To straujais pieaugums uz bagātīgiem barības vielām kavē mikobaktēriju veidošanos un neļauj izolēt tuberkulozes izraisītāju, tādēļ pirms sējas diagnostikas materiāls ir pakļauts iepriekšējai apstrādei. Turklāt mikobaktērijas, kas izdalās no pacienta elpceļiem, parasti ieskauj liels daudzums gļotu, kas apgrūtina koncentrēšanos. Šajā sakarā, pirms sējas un citu līdzīgu materiālu sēšanas, ir nepieciešama to sašķidrināšana un attīrīšana.

Visiem mazgāšanas līdzekļiem un dekontaminantiem ir vairāk vai mazāk izteikta toksiska iedarbība uz mikobaktērijām. Kā rezultātā pārstrādes līdz 90% mikobaktēriju var nomirt. Lai saglabātu pietiekamu mikobaktēriju populācijas daļu, ir jāizmanto vieglas apstrādes metodes, kas, no vienas puses, ļauj apturēt strauji augošus pirogēnus un putekļainus mikroorganismus un, no otras puses, saglabāt materiālā esošo mikobaktēriju dzīvotspēju.

Atkarībā no materiāla, tā viendabīguma un piesārņojuma pakāpes, pirms sējas tiek izmantoti dažādi dezinfekcijas līdzekļi: krēpu - nātrija hidroksīda šķīdumam - 4%, trīs aizvietotu nātrija fosfāta šķīdumiem, 10%, benzalkonija hlorīda trinātrija fosfātam, NALC-NaOH (N-acetil-L-cisteīns) nātrija hidroksīds) ar galīgo NaOH koncentrāciju 1%, urīnam un citiem šķidriem materiāliem - sērskābes šķīdumu 3%, piesārņotiem paraugiem, tauku saturošiem materiāliem - skābeņskābes šķīdums līdz 5%. Turklāt dažos gadījumos izmantojiet fermentus, virsmaktīvās vielas (mazgāšanas līdzekļus). Dažu citu mazgāšanas līdzekļu lietošana ir saistīta ar mazāku mikobaktēriju šūnu nāvi (40-50% izdzīvo). tomēr tos var izmantot tikai šķidrajiem materiāliem. Visplašāk izplatītais pasaulē saņēma NALC-NaOH. izlaists komplektos. Šī metode ļauj izvēlēties vairāk nekā 85% mikobaktēriju šūnu populācijas. Audu saturošu cietu materiālu dekontaminācija ir sarežģītāka, jo ir grūti uzminēt materiāla dispersijas pakāpi homogenizācijas procesā. Piemēram, limfmezglu biopsijas paraugu apstrāde bieži vien ir saistīta ar paaugstinātu piesārņojuma biežumu ar svešām florām. Šajā gadījumā var izmantot 1% etoniju.

Nehomogēns materiāls tiek homogenizēts, izmantojot stikla lodītes dekontaminantu klātbūtnē. Šķidrie materiāli tiek iepriekš centrifugēti un tiek apstrādātas tikai nogulsnes.

Sēšanas un inkubācijas metodes

Pēc pirmapstrādes materiāls tiek centrifugēts, tāpēc mikobaktērijas tiek nogulsnētas un to saturs sedimentos palielinās (“sedimentu bagātināšana”). Iegūtās nogulsnes tiek pakļautas neitralizācijai un sēklas ar to (inokulē) blīvās barotnes virsmu vai mēģenes ar šķidrumu (daļēji šķidrumu). No pārējām nogulsnēm mikroskopiskai pārbaudei sagatavo uztriepes. Sēšanas metodei ir jānovērš diagnostiskā materiāla savstarpēja piesārņošana.

Mikrobioloģisko pētījumu rezultātu drošai klīniskai interpretācijai ir jāievēro šāds noteikums: mikroskopiskie un kultūras pētījumi jāveic paralēli no tā paša diagnostikas materiāla parauga.

Inokulētās caurules ievieto termostatā pie 37 o С 2 dienas horizontālā stāvoklī. Tas nodrošina vienmērīgāku materiāla uzsūkšanos barības vidē. Pēc 2 dienām caurules tiek novietotas vertikālā stāvoklī un hermētiski noslēgtas ar gumijas vai silikona aizbāžņiem, lai novērstu sēklas materiāla izžūšanu.

Kultūras, kas tiek turētas termostatā 37 ° C temperatūrā 10-12 nedēļas ar regulāru iknedēļas apskati. Katrā testa skatā tiek reģistrēti šādi parametri:

• vizuāli novērots no sējas augšanas dienas;
• pieauguma temps (CFU skaits);
• stādīšanas piesārņojums ar svešām mikrobu florām vai sēnēm (šādas caurules tiek noņemtas);
• nav redzamas izaugsmes. Caurules paliek termostatā līdz nākamajai apskatei.

Uzturvielu barotne

Mikobaktēriju audzēšanai, izmantojot dažādas barības vielas; blīvs, daļēji šķidrs, šķidrums. Tomēr nevienai no pazīstamajām barotnēm nav tādu īpašību, kas nodrošina visu mikobaktēriju šūnu augšanu. Šajā sakarībā, lai uzlabotu veiktspēju, ieteicams vienlaicīgi izmantot 2-3 dažādu sastāvu uzturvielas.

PVO iesaka Lowenstein-Jensen barotni kā standarta tuberkulozes izraisītāja primārās izolācijas līdzekli un tā jutīguma noteikšanu. Tā ir blīva olu barotne, kurā mikobaktēriju augšanu iegūst 20.-25. Dienā pēc bakterioloģiski pozitīva materiāla sēšanas. Bakterioskopiski negatīva materiāla kultūrām nepieciešams ilgāks inkubācijas periods (līdz 10-12 nedēļām).

Mūsu valstī piedāvātais E.R. Finn Egg Medium Finn II. Tas atšķiras ar to, ka L-asparagīna vietā tā izmanto mononātrija glutamātu, kas izraisa citus mikobaktēriju aminoskābju sintēzes veidus. Pieaugums šajā vidē ir nedaudz agrāk, un mikobaktēriju sekrēcijas biežums ir par 6–8% lielāks nekā Levenshtein-Jensen vidē.

Lai uzlabotu ekstrapulmonālās tuberkulozes bakterioloģiskās diagnozes efektivitāti, ieteicams iekļaut Finn-II modificēto mediju barības vielu kompleksā. Lai paātrinātu augšanu, uzturvielas vidē Finn-II pievieno nātrija tioglikolātu (0,05%), kas samazina skābekļa koncentrāciju. Lai aizsargātu mikobaktēriju fermentu sistēmas no toksiskiem lipīdu peroksidācijas produktiem, α-tokoferola acetāta antioksidants tiek ievadīts barotnes vidē Finn-II ar koncentrāciju 0,001 µg / ml. Sēšanas diagnostikas materiāls, kas iegūts, izmantojot standarta metodi.

Krievijas antitubulārajās laboratorijās tiek izmantotas citas blīvas barības vielu izmaiņas; G.G. Mordovijas barības vielu barotne "New", izstrādāta V.A. Anikin barības vielu barotne A-6 un A-9 utt.

Sakarā ar to, ka ķīmijterapijas laikā ir bojātas dažādas mikrobu šūnu vielmaiņas sistēmas, daļa mikobaktēriju populācijas zaudē spēju normāli attīstīties parastās barības vielās un prasa osmotiski līdzsvarotu (daļēji šķidru vai šķidru) barības vielu barotni.

Sēšanas diagnostikas materiāla rezultātu novērtēšana un reģistrēšana

Daži celmi un mikobaktēriju veidi aug lēni, augšana var parādīties pat 90. dienā. Šādu kultūraugu skaits ir neliels, bet tas iztur tos no termostata kultūrām 2,5-3 mēnešus.

Mycobacterium tuberculosis virulentās kultūras parasti aug uz blīviem olu barotnēm, veidojot dažādu izmēru un sugu R-veida kolonijas. Kolonijas ir sausas, grumbušas, ziloņkaula, nedaudz pigmentētas. Citās vidēs Mycobacterium tuberculosis kolonijas var būt mitrākas. Pēc ķīmijterapijas kursa vai ārstēšanas gaitā var atbrīvoties gludas kolonijas ar mitru augšanu (S-formas).

Izolējot kultūras, tiek izmantots speciālu pētījumu komplekss, kas ļauj atšķirt mikobaktēriju tuberkulozi no mikrobaktērijām un skābju rezistentiem saprofītiem.

Pozitīva atbilde tiek sniegta pēc obligātas mikroskopiskas Zil-Nelsen krāsotas uztriepes pārbaudes no audzētām kolonijām. Mikobaktēriju augšanas gadījumā uztriepēs ir spilgti sarkani stieņi, kas atrodas atsevišķi vai grupās, veidojot kopas filca vai bizītes veidā. Jaunajās kultūrās, kas īpaši izolētas no ilgstoši ārstētiem pacientiem ar ķīmijterapiju, mikobaktērijām ir raksturīgs izteikts polimorfisms līdz īsu, gandrīz kokcoidu vai garu variantu klātbūtnei, līdzīgi sēņu micēlijam, kopā ar stieņu formām.

Mikobaktēriju augšanas ātrumu norāda ar šādu shēmu: (+) - 1-20 CFU testa mēģenē (maza baktēriju izdalīšanās); (++) - 20-100 CFU in vitro (vidēja baktēriju izdalīšanās); (+++) -\u003e 100 CFU in vitro (bagātīga baktēriju ekskrēcija). Tuberkulozes laboratorijas diagnostikā nepietiek, lai sniegtu atbildi, vai mikobaktēriju konstatē ar šo vai šo metodi. detalizēti izprast mikobaktēriju populācijas apjomu un raksturu, tā sastāvu un īpašības. Šie dati ļauj pareizi interpretēt procesa stāvokli, plānot taktiku un nekavējoties izlabot ārstēšanu.

Pēdējos gados, lai paātrinātu mikobaktēriju augšanu, ir ierosināti barības vielas uz agara bāzes ar dažādiem augšanas piedevām un īpašu gāzu maisījumu. Lai panāktu mikobaktēriju augšanu šajās barotnēs audzēšanas laikā, izveidojiet atmosfēru ar augstu oglekļa dioksīda saturu (4-7%). Šim nolūkam tiek izmantoti īpaši CO 2 inkubatori. Tomēr vispopulārākās automatizētās mikobaktēriju audzēšanas: MGIT-BACTEC-960 un MB / Bact.

Viena šāda sistēma ir MGIT sistēma (mikobaktēriju augšanas indikācijas caurule), kas ir augsto tehnoloģiju attīstība, kas paredzēta, lai paātrinātu tuberkulozes bakterioloģisko diagnozi un noteiktu mikobaktēriju jutību pret pirmās līnijas zālēm un dažām otrās līnijas zālēm. MGIT ir vērsta uz to, lai to izmantotu kā daļu no VASTES-960 ierīces. Mikroorganismus kultivē īpašās caurulēs ar šķidru barotni, pamatojoties uz modificētu vidēju Middlebrook-7H9. Lai stimulētu mikobaktēriju augšanu un kavētu svešu mikrofloru, MGIT augšanas papildinājumu un antibakteriālo zāļu PANTA maisījumu.

Mikroorganismu augšanas reģistrācija notiek optiski. Tas balstās uz fluorescenci, ko izraisa skābekļa patēriņš mikobaktēriju augšanas procesā. Ar skābekli atkarīga fluorohroma krāsviela atrodas īpašas mēģenes apakšā un ir pārklāta ar silikona slāni. Mikobaktēriju vairošanās izraisa skābekļa daudzuma samazināšanos mēģenē un tā koncentrācijas samazināšanos, kas izraisa fluorescences palielināšanos, kas kļūst redzama, kad caurule ir apstarota ar ultravioleto gaismu un automātiski tiek konstatēta ar VASTES-960 ierīcē iebūvētajiem foto sensoriem. Spīduma intensitāte tiek reģistrēta augšanas vienībās (GU-augšanas vienības). Augšanas dati tiek ievadīti datorā, kur to var automātiski saglabāt. Augšanas līkņu datoranalīze var sniegt informāciju par dažādu mikobaktēriju pūlu klātbūtni, ieskaitot ne-tuberkulozus, kā arī palīdz novērtēt mikobaktēriju augšanas īpašības.

Šādu sistēmu ieviešanas rezultātā tika ievērojami samazināts mikobaktēriju augšanas laiks, vidēji 11 dienas WASTES-960 un 19 dienas MB / Bact un 33 dienas standarta blīvā barotnē. Jāatzīmē, ka šīm sistēmām ir vajadzīgs augsti kvalificēts personāls. Sēšanas materiāls uz šķidrajiem medijiem jāpapildina ar sēšanu uz Levenshteyn-Jensen barotnes, kurai ir svarīga loma, ja tuberkuloze neizraisa augšanu citos medijos.

Mikobaktēriju zāļu jutības noteikšana

Mikobaktēriju spektra un jutības pakāpes noteikšanai pret tuberkulozes zālēm ir nozīmīga klīniskā nozīme, kā arī zāļu rezistentās tuberkulozes izplatības epidemioloģiskais novērtējums. Turklāt zāļu rezistences uzraudzība ļauj novērtēt visas pret tuberkulozes programmas efektivitāti, jo tas ir neatņemams visu tuberkulozes apkarošanas darbību komponentu darba rādītājs.

Zāļu jutīguma daudzveidība un laiks:

• pirms ārstēšanas uzsākšanas, lai noteiktu ārstēšanas stratēģiju un taktiku:
• izolējot no pacientu kultūrām no dažādiem materiāliem (krēpām, BAL, urīnu, eksudātiem, šķidrumiem utt.), pārbauda visus izolētos celmus:
• intensīvas terapijas fāzes beigās, ja nav klīniskās un radioloģiskās dinamikas:
• ja nepieciešams, mainiet ārstēšanas shēmu, ja:
  • krēpu negatīvisma trūkums;
  • kultūras atkārtota izolēšana pēc krēpu negatīvisma;
  • straujš KUM skaita pieaugums uztriepēs pēc sākotnējā samazinājuma. Ir labi zināms, ka Mycobacterium tuberculosis celmi, kas ir neviendabīgi attiecībā uz zāļu jutīgumu, tiek izolēti no materiāla, ko iegūst no tuberkulozes pacienta. Celmu jutīgums pret zālēm pret tuberkulozi var atšķirties atkarībā no zāļu klāsta, pretestības pakāpes, biežuma un ātruma.

Mycobacterium tuberculosis zāļu rezistences pakāpe tiek noteikta saskaņā ar noteiktajiem kritērijiem, kas ir vērsti uz rezistences klīnisko nozīmību un ir atkarīgi no zāļu pret tuberkulozes aktivitātes, tā farmakokinētikas un koncentrācijas bojājumā. maksimālā terapeitiskā deva un tā tālāk.

Mikobaktēriju jutības noteikšana šobrīd tiek veikta ar mikrobioloģiskām metodēm:

• absolūtās koncentrācijas (atšķaidīšanas metode uz cietas vai šķidras barības vielas), \\ t
• proporcijas
• pretestības koeficients.

Rezistence parasti izpaužas kā vizuāli novērota Mycobacterium tuberculosis koloniju augšana, tomēr ir metodes, kas izraisa Mycobacterium šūnu dalīšanās sākumposmā krāsu reakciju veidā. Šīs metodes samazina testa laiku no 3-4 nedēļām.

PVO ķīmijterapijas komitejas ieteiktā absolūtās koncentrācijas metode, kas no metodoloģiskā viedokļa ir visvienkāršākā, bet prasa augstu standartizāciju un laboratorijas procedūru precizitāti, ir kļuvusi plaši izplatīta Krievijā. Zāļu jutības tests sastāv no cauruļu kopas ar barības vielu barotni, kas modificēta ar pret tuberkulozes zālēm. Komplekts sastāv no 2-3 caurulēm ar dažādām koncentrācijām katrā no izmantotajām zālēm, vienu kontroles cauruli ar barotni bez medikamenta un vienu cauruli, kas satur 1000 μg / ml nātrija salicilāta vai 500 μg / ml para-nitrobenzoskābes, lai noteiktu ne-tuberkulozas mikobaktēriju augšanu.

Lai sagatavotu mediju komplektu ar zālēm, izmantojot modificētu vidēju Lowenstein-Jensen (bez cietes), kas ielej kolbās. Katrā kolbā pievieno noteiktu daudzumu atbilstošas ​​atšķaidīšanas pret TB. Kolbu saturu rūpīgi samaisa, ielej testa mēģenēs un 40 minūtes slīpā stāvoklī velmē 85 ° C temperatūrā. Ieteicams saudzēt barotni elektriskā skrūvgriezī ar automātisku temperatūras kontroli. Vidēja viela ar pret tuberkulozi

1. rindu var uzglabāt ledusskapī 2–4 ° C temperatūrā 1 mēnesi, ar otrās rindas narkotikām - ne vairāk kā 2 nedēļas. Nav pieņemams uzglabāšanas līdzeklis ar zālēm istabas temperatūrā. Sagatavojot anti-tuberkulozes medikamentu risinājumus, tiek ņemta vērā to aktivitāte, aprēķinot koncentrāciju, kas koriģēta atbilstoši nespecifiskās zāļu daļas tīrībai, tīrībai utt. Noteikt zāļu jutīgumu, izmantojot tikai ķīmiski tīras vielas.

Metodes princips ir noteikt anti-tuberkulozes zāļu koncentrāciju, kas nomāc ievērojamu mikobaktēriju populācijas pieaugumu. Pareizi izpildot šo metodi, ir laba precizitāte.

Pirms testēšanas nepieciešams pārliecināties, ka izvēlētajai Mycobacterium tuberculosis kultūrai nav svešas mikrofloras. No mikobaktēriju kultūras 0,9% nātrija hlorīda šķīdumā tiek sagatavota viendabīga suspensija, kas satur 500 miljonus mikrobu šūnu 1 ml (optiskās duļķainības standarts 5 vienības). Iegūto suspensiju atšķaida ar 0,9% nātrija hlorīda šķīdumu (1:10) un 0,2 ml suspensijas pievieno katrai kultūras barotnes mēģenei. Uzklātās caurules ievieto termostatā 37 ° C temperatūrā un 2-3 dienas tur horizontālā stāvoklī, lai barotnes vidēja slīpā virsma tiktu vienmērīgi inokulēta ar mycobacterium tuberculosis suspensiju. Tad caurules pārnes vertikālā stāvoklī un inkubē 3-4 nedēļas. Rezultātu mērīšana notiek 3-4 nedēļās.

Tā kā patogēna izolācijas laiks no klīniskā materiāla uz barības vielām ir vismaz 1–1,5 mēneši, narkotiku jutības noteikšanas rezultātus ar šo metodi var iegūt ne agrāk kā 2–2,5 mēnešus pēc materiāla sēšanas. Tas ir viens no galvenajiem metodes trūkumiem.

Interpretēt mikobaktēriju jutīguma noteikšanas rezultātus, pamatojoties uz noteiktiem kritērijiem. Blīvā vidē tiek uzskatīts, ka kultūra ir jutīga pret medikamenta koncentrāciju, ja šajā mēģenē audzēto mikobaktēriju koloniju skaits ar šo medikamentu nepārsniedz 20 ar plašu augšanu uz kontroles caurules bez zālēm. Tikai vairāk nekā 20 koloniju klātbūtnē kultūra tiek uzskatīta par rezistentu pret šo koncentrāciju. Praksē, saņemot eksperimentālo cauruļu izaugsmes rezultātus, gandrīz 20 CFU. ir jāinformē klīniskā vienība, ka šajā gadījumā jutīgums vai stabilitāte ir robežas, jo tas dažreiz var izskaidrot klīnisko rādītāju neskaidru dinamiku.

Dažādām zālēm tiek noteikta noteikta koncentrācija, kurā tiek novērota kritiskās mikobaktēriju populācijas vairošanās. Šīs koncentrācijas sauc par "kritiskām". Kā stabilitātes kritērijs tiek izmantots mikobaktēriju populācijas augšanas ātrums barības vidē ar narkotiku kritiskā koncentrācijā.

Iekšējā ftisioloģiskajā praksē zāļu rezistences noteikšana neaprobežojas tikai ar kritisko koncentrāciju noteikšanu. Tas ir saistīts ar faktu. ka patogēno zāļu rezistences līmeņa paplašināta noteikšana ļauj ārstam precīzāk veidot ķīmijterapijas taktiku, izmantojot zināšanas par zāļu kombināciju pastiprinošo iedarbību, paredzēt krustenisko rezistenci, vai izmantot efektīvākas zāles, ko lieto pret tuberkulozi lietoto zāļu grupas.

Absolūtā koncentrācijas metode ir visvienkāršākā, bet arī visjutīgākā pret kļūdām, kas veiktas, veicot to. Uzticamāka, jo īpaši, nosakot jutību pret otrās līnijas zālēm, un proporciju metode ir izplatīta ārpus Krievijas. Tajā ir ņemtas vērā absolūtās koncentrācijas metodes nepilnības, taču tas ir vairāk laika.

Metode ir ļoti līdzīga absolūtās koncentrācijas metodei. Testa mēģenes sagatavošana ar tādiem pašiem veidiem. kā absolūtā koncentrācijas metode. Tomēr Mycobacterium tuberculosis suspensijas sējas devu samazina par 10 reizēm. tas nosaka dažu Mycobacterium tuberculosis celmu spontānās rezistences biežumu pret zālēm, piemēram, etambutolu, protionamīdu, kapreomicīnu. Kā kontroli, izmantojiet 2 vai 3 caurules ar sēklu devu, kas ir vienāda ar testa mēģenēm, sērijveidā atšķaidot 10 un 100 reizes. Izturības kritērijs ir vizuāli novērotā Mycobacterium tuberculosis augšanas proporcija. Pirmajā rindā esošajiem medikamentiem ilgtspējības kritērijs ir pieaugums par 1% no sākotnējās populācijas, otrās rindas narkotikām - pieaugums 1 vai vairāk nekā 10% no sākotnējās, atkarībā no izvēlētās kritiskās koncentrācijas.

1997. gadā PVO un Starptautiskās pret tuberkulozes apkarošanas savienības darba grupa, lai atklātu pret tuberkulozi vērstu zāļu rezistenci, pielāgoja šos kritērijus, norādot, ka mikobaktērijas, kas aug uz Levenshteyn-Jensen blīvā olu barotnē, uzskatāmas par stabilām šādās koncentrācijās:

• dihidrostreptomicīns - 4 µg / ml;
• izoniazīds - 0,2 µg / ml:
• rifampicīns - 40 µg / ml:
• Etambutols - 2 µg / ml.

2001. gadā tika ierosinātas kritiskās koncentrācijas šādām otrās līnijas zālēm (kritiskā daļa - 1%):

• kapreomicīns - 40 µg / ml;
• protionamīds - 40 µg / ml;
• kanamicīns - 30 µg / ml;
• viomicīns - 30 µg / ml;
• cikloserīns - 40 µg / ml;
• aminosalicilskābe - 0,5 µg / ml;
• ofloksacīns - 2 µg / ml.

Izaugsmes rezultātus novērtē pēc 4 nedēļām kā provizoriskas un pēc 6 nedēļu audzēšanas gala.

Lai noteiktu narkotiku jutību pret pirazinamīdu, ko plaši izmanto modernā tuberkulozes ķīmijterapijā, ieteicamā kritiskā koncentrācija ir 200 µg / ml. Tomēr joprojām nav vispārpieņemtas metodes zāļu rezistences noteikšanai pret šo medikamentu uz cietām barotnēm, jo ​​tās antibakteriālā aktivitāte izpaužas tikai skābā vidē (pH

Lai novērtētu mikobaktēriju jutīguma noteikšanas rezultātu kvalitāti, ieteicams katru jauno Lowenstein-Jensen barotnes partiju uzraudzīt, paralēli nosakot standarta muzejs H37Rv jutību. Turklāt ir daži mikrobioloģiskie kritēriji, kas jāizpilda, lai metodoloģija varētu radīt labi reproducējamu un pareizi interpretējamu rezultātu. Tie ietver Mycobacterium tuberculosis kultūras dzīvotspēju, noteikumus par viendabīgas suspensijas un suspensijas iegūšanu, noteikumus par Mycobacterium tuberculosis kultūru izvēli, izvēlētās baktēriju masas reprezentativitāti. Zāļu rezistences noteikšanas ticamība samazinās, ja baktēriju ekskrēcija ir ļoti vāja.

Nesen ir dota daudzsološa atzīta metode narkotiku jutīguma noteikšanai, izmantojot automatizētas sistēmas. Visprogresīvākie šajā jomā ir attīstība, kas balstīta uz WASTES MGIT-960. Šajā gadījumā mycobacterium tuberculosis narkotiku jutība tiek noteikta, pamatojoties uz modificētu proporciju metodi. Noteikšanas procesā mikobaktēriju tuberkulozes augšanas ātrums tiek salīdzināts kontroles caurulē un testa mēģenēs ar zālēm. SIRE komplektā iekļautie bagātinātāji un antibiotikas tiek lietotas, lai noteiktu jutību pret streptomicīnu, izoniazīdu, rifa pikīnu un etambutolu. Lai noteiktu jutību pret pirazinamīdu, izmantojiet PZA komplektu. Testa laikā mikobaktēriju tuberkulozes suspensiju inokulē ar mēģenēm ar zālēm, kā arī kontroles caurulēm ar 100% atšķaidīšanu visiem preparātiem, izņemot pirazinamīdu, kur suspensijas atšķaidījums ir 10 reizes. Ilgtspējas kritērijs ir mikobaktēriju pieauguma rādītājs 100 GU, kad tiek sasniegts kontroles kontroles mēģenes 400 GU pieaugums (sk. „Mikobaktēriju izolācijas kultūras metodes”). Rezultātu uzskaite un interpretācija tiek veikta automātiski, un to nosaka ievadītā vai atlasītā programma.

Kā kritiskās koncentrācijas galīgās koncentrācijas tiek izmantotas mēģenē ar šķidru barības vielu. Pašlaik kritiskās koncentrācijas ir izstrādātas gan 1. rindas zālēm, gan dažām 2. rindas zālēm. Jāatzīmē, ka Mycobacterium tuberculosis jutības noteikšana pret cikloserīnu un aminosalicilskābi tiek veikta tikai uz olu barības vielām.

Sīki izstrādāts darba protokols, izmantojot aprakstīto sistēmu, ļauj veikt pētījumu par zāļu jutību gan izolētajā kultūrā (ar blīvu barības vielu), gan izmantojot mikobaktēriju primāro augšanu MGIT mēģenē. Pēdējā iespēja ievērojami samazina kultūras pētījumu laiku, ļaujot jums iegūt pilnīgus rezultātus par Mycobacterium tuberculosis kultūru (ieskaitot informāciju par zāļu jutību) pēc 3 nedēļām no materiāla savākšanas dienas, bet tradicionālo metodi var iegūt tikai līdz 3. mēnesim. Iegūtais laiks, kad pacients atrodas intensīvajā ārstēšanas fāzē, var kompensēt relatīvās augstās pētniecības izmaksas.

Mikobaktēriju diferenciācija

Ņemot vērā to, ka izmantotie barības vielu nesēji nav stingri selektīvi. turpmāka izolēto mikobaktēriju diferenciācija tiek atzīta par obligātu. Mikobaktēriju diferenciācijas nepieciešamība ir saistīta ar vairākām ģints ģenētisko procesu izraisīto patoloģisko procesu pazīmēm: atšķirīgs tuberkulozes un mikobaktēriju gaita un iznākums, dabiska zāļu rezistence pret dažām pret tuberkulozes zālēm.

Ir atzīts, ka M. tuberculosis kompleksa mikobaktēriju primārā identifikācija no ne-tuberkulozes mikobaktērijām tiek veikta saskaņā ar šādām īpašībām: augšanas ātrums uz blīvu barības vielu barotnēm, pigmentācija, kolonijas morfoloģija, skābju rezistences klātbūtne un augšanas temperatūras optimums.

Diemžēl nav nevienas laboratorijas metodes, kas varētu droši atšķirt M. tuberculosis kompleksa mikobaktērijas no citiem skābju rezistentiem mikobaktērijiem, tomēr iepriekš minēto pazīmju kombinācija ar vairāku turpmāk uzskaitīto bioķīmisko testu rezultātiem ļauj identificēt M. tuberculosis kompleksa mikobaktērijas ar varbūtību 95%.

Lai diferencētu M. tuberculosis kompleksa (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovisBCG, M. africanum, M. microti, M. canettii uc) mikobaktērijas no lēni augošas ne-tuberkulozes mikobaktērijām, tiek izmantoti pamata bioķīmiskie testi, lai noteiktu šādas pazīmes:

• spēja ražot nikotīnskābi (niacīna tests):
• nitrāta reduktāzes aktivitāte;
• termostabilā katalāze;
• augšanu uz barotnes ar nātrija salicilātu (1 mg / ml).

Kā papildus jūs varat izmantot arī augšanas testus uz barotnes, kas satur 500 μg / ml p-nitrobenzoskābes vai 5% nātrija hlorīda.

Daudzas bakterioloģiskās laboratorijas šos mikroorganismus identificē tikai kompleksa līmenī, kas ir saistīts ar laboratoriju ierobežotajām iespējām un speciālistu metodiskajām iespējām.

Vairumā gadījumu M. tuberculosis un M. bovis diferencēšanai praksē pietiek ar šādiem testiem: niacīns, nitrātu reduktāzes klātbūtnei, pirazinamidāzes klātbūtnei un augšanas reģistrācijai barotnē, kas satur 2 μg / ml tiofēn-2-karbonskābes hidrazīda. Tajā pašā laikā tiek ņemts vērā, ka M. tuberculosis kompleksa mikobaktērijas raksturo šādas īpašības:

• lēna izaugsme (vairāk nekā 3 nedēļas);
• augšanas temperatūra no 35 līdz 37 o C;
• pigmenta veidošanās trūkums (ziloņkaula krāsa);
• izteikta skābes izturīga krāsa;
• pozitīva niacīna mīkla;
• pozitīvs nitrāta reduktāzes tests;
• termostabilas katalāzes trūkums (68 ° C).
• izaugsmes trūkums vidē Lowenstein-Jensen, kas satur: \\ t
  • 1000 µg / ml nātrija salicilāta, \\ t
  • 500 µg / ml paranitrobenzoskābes, \\ t
  • 5% nātrija hlorīds:
• augšana 1–5 μg / ml tiofēn-2-karbonskābes klātbūtnē.

Izolēto mikobaktēriju diferenciācijas nozīmīgums ievērojami palielināsies, palielinoties ar tuberkulozi vai mikobaktēriju saistītu HIV / AIDS gadījumu reģistrācijas biežumam. Pašlaik nav absolūtas pārliecības par to, ka praktiskās reģionālās laboratorijas ir gatavas pareizi veikt šo darbu.

Tuberkulozes imunoloģiskā diagnoze

Ir vairākas universālas parādības, narkotikas un imunoloģiskie testi, kas sākotnēji tika atklāti tuberkulozes laikā vai imūnās atbildes reakcijas uz mikobaktērijām modeli. Tie ietver BCG un tuberkulīnu, fenomenu, piemēram, ādas HRT (\\ t tuberkulīna testus  - Pirke un Mantoux reakcijas, reakcija uz tuberkulīna subkutānu ievadīšanu jutīgiem dzīvniekiem (Koch fenomens). Dažas no pirmajām infekcijas slimības antivielām tika konstatētas arī tuberkulozē. Protams, jo dziļāka izpratne par imunitātes pret tuberkulozi mehānismiem un to ģenētisko kontroli, jo plašāka var būt imunoloģisko metožu un medikamentu izmantošana, kas ietekmē imūnsistēmu, lai atrisinātu praktiskās problēmas, kas saistītas ar fthisiology.

Pašlaik svarīgākā un sarežģītākā praktiskā problēma tiek uzskatīta par tuberkulozes atklāšanu iedzīvotāju masu skrīninga procesā. Tomēr, neskatoties uz daudziem ziņojumiem par „panākumiem” (par ierobežotu materiālu), nav piemērotas imunoloģiskās metodes (atveidotas „jebkurās rokās”) un preparāts šiem mērķiem.

Klīniskajā praksē ļoti plaši tiek izmantotas imunoloģiskās metodes, jo īpaši seroloģiskie pētījumi (antigēnu, antivielu noteikšana) un tuberkulīna provokācijas testi.

Pirmkārt, starp imunoloģiskajiem pētījumiem, ko izmanto diferenciāldiagnozē, ir seroloģiskās metodes - antigēnu un antivielu definīcija dažādos ķermeņa materiālos.

Mycobacterium tuberculosis antivielu noteikšanas specifika ir atkarīga no imūnanalīzē izmantotajiem antigēniem. Ir ierosināts ievērojams antigēnu daudzums, no kuriem pirmais ir tuberkulīna PPD:

• PPD un citi kompleksie preparāti no kultūras šķidruma;
• ultraskaņas noārdīšanās;
• tritona ekstrakts un citi kompleksie šūnu sienu preparāti;
• 5 antigēns (Daniel);
• 60 antigēns (Coccito);
• lipoarabinomannāns;
• vadu faktors (trehalozes-6,6-diolāts);
• fenola un citi glikolipīdi;
• lipopolizaharīdi;
• fibronektīna saistošu antigēnu;
• olbaltumvielas (visbiežāk rekombinants); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 KDA un citi.

Krievu un ārvalstu zinātnieku pētījumu rezultātā tika atklāti galvenie antivielu ražošanas modeļi un tuberkulozes seroloģiskās diagnozes efektivitāte: jo sarežģītāks ir antigēns, jo augstāks jutīgums un mazāks testu specifiskums. Specifiskums. \\ T dažādās valstīs  atšķiras atkarībā no M. tuberculosis populācijas infekcijas un ne-tuberkulozes mikobaktērijām, BCG vakcinācijas utt. Bērniem serodiagnozes informācijas saturs ir mazāks nekā pieaugušajiem. Primārajā tuberkulozē (bieži bērni) IgM definīcija ir informatīvāka. ar sekundāro - IgG. HIV inficētajā serodiagnostikas informācijā antivielu noteikšana samazinās. Antivielu noteikšanas efektivitāte ir atkarīga no vairākiem „klīniskiem momentiem”: procesa aktivitāte (mikobaktēriju “izolācijas” klātbūtne vai neesamība, sabrukšanas dobumu klātbūtne, infiltrācijas pakāpe), procesa apjoms, tā ilgums.

Enzīmu imūnanalīzes (ELISA) metodes jutība ir aptuveni 70%. Pētījuma efektivitātes trūkums ir saistīts ar tā zemo specifiku. Iepriekš tika apsvērta iespēja izmantot seroloģisko skrīningu grupās augsts risksjo īpaši tiem, kam pēc tuberkulozes ir plaušu pārmaiņas.

Lai palielinātu ELISA specifiku, turpina meklēt specifiskākus antigēnus, tostarp tos, kas iegūti gēnu inženierijā, ESAT-6 un citi (skatīt iepriekš). Stingri specifisku antigēnu (38 kDa, ESAT) lietošana palielina specifiskumu. bet ievērojami samazina analīzes jutīgumu. Papildus ELISA (eksperimentālās laboratorijas testu sistēmas, piemēram, Pathozyme ELISA komplekts) tika piedāvātas arī imūnochromatogrāfijas komplekti ar sānu filtrāciju (Mycodot), kā arī citi līdzīgi testi (punktu analīze uz membrānas) ar vizuālu testa rezultātu. Veicot šos testus, analīze notiek 10-30 minūšu laikā; tām nav nepieciešama īpaša iekārta, ir nepieciešams vizuāls rezultātu novērtējums, kas saistīts ar zināmu subjektīvību. Šīm metodēm ir aptuveni tādas pašas jutības un specifiskuma pazīmes (attiecīgi 70% un 90-93%) kā tradicionālā ELISA.

Imūnanalīzes metožu izmantošanai ir zināma vērtība kā papildu metode, kas tiek ņemta vērā izmantoto metožu kompleksā tuberkulozes diferenciāldiagnozē, īpaši tās ekstrapulmonālo formu diagnostikā. ELISA ir visefektīvākā tuberkuloza meningīta diagnosticēšanai cerebrospinālā šķidruma pētījumā. Šajā gadījumā analīzes jutīgums ir 80-85%, un specifiskums ir 97-98%. Ir pierādījumi par to, ka tuberkulozes uveīta diagnosticēšanā asins šķidrumā tiek konstatētas antivielas pret mikobaktēriju tuberkulozi.

Gamma-interferona sintēzes indukcija in vitro

Gamma-interferons (IFN-γ) ir specifiskas imūnās aizsardzības faktors, kas tiek realizēts, aktivizējot makrofāgu fermentu sistēmas. IFN-γ sintēzes izraisīšana ar sensibilizētiem T-limfocītiem izraisa to mijiedarbību ar mikobaktēriju antigēniem.

Kā antigēni izmanto kā tuberkulīna PPD. un specifiskie antigēni, kas iegūti, izmantojot gēnu inženieriju, jo īpaši antigēni ESAT-6 (agri izdalīts antigēns ar molekulmasu 6 kDa) un CFP-10 (proteīna kultūras filtrāts, 10 kDa). Šūnās nav ģenētiskās inženierijas vai rekombinanto antigēnu bCG vakcīna  un citas mikobaktērijas. Izmantojot tuberkulīnu, IFN-γ indukcijas testa rezultāti ir salīdzināmi ar tuberkulīna ādas testa rezultātiem (tieša korelācija). Lietojot ģenētiski modificētus antigēnus, testa rezultāti ir specifiskāki un nav atkarīgi no iepriekšējās BCG vakcinācijas. Pārbaudot vakcinētos cilvēkus, kuriem nebija kontakta ar tuberkulozes infekciju, testa specifika ir 99%. Testa jutīgums pacientiem ar tuberkulozi svārstās no 81 līdz 89%.

Ir izstrādāti testu un diagnostikas testi, kas balstīti uz asins šūnu vai mononukleāro šūnu, kas izolētas no asinīm, īslaicīgu kultivēšanu ar in vitro Mycobacterium tuberculosis antigēniem, pēc tam nosakot IFN-γ koncentrāciju vai aprēķinot IFN-γ sintezējošo T-limfocītu skaitu. In vitro sintezētā interferona koncentrācija, ko nosaka ar ELISA palīdzību, izmantojot monoklonālas antivielas, kas saistās ar IFN-γ. Pēc tam, izmantojot kalibrēšanas standartu, IFN-γ nosaka tā koncentrāciju testa mēģenē vai tabletes iedobēs.

Veicot Elispot testu, T-limfocītu skaits, kas sintezē IFN-γ. uz kausa virsmas, pārklāts ar antivielām pret IFN-γ.

diagnostikas izstrādātāji, kas balstīti uz IFN-γ indukciju in vitro, ko apstiprinājusi ASV Narkotiku un zāļu aģentūra, apgalvo, ka ar testa palīdzību nav iespējams diferencēt latento tuberkulozes infekciju no aktīvas tuberkulozes. Tāpēc reģionos ar augstu infekcijas līmeni testam nav tiešas diagnostikas vērtības. Tomēr mūsu valstī to var izmantot, lai diferencētu tuberkulozes infekcijas bērniem pēc vakcinācijas ar alerģijām, kā arī novērtētu specifiskās imunitātes līmeni ārstēšanas procesā.

Pašlaik tiek pētīta vietējā testēšanas sistēma, lai noteiktu specifisku tuberkulozes antigēnu IFN-γ sintēzes indukciju in vitro.

Imūnsistēma un tuberkulozes gaita, imunokorekcija

Cilvēku tuberkulozes ārstēšanas procesā notiek izmaiņas antigenēmijā un imūnsistēmas stāvoklī.

Dati par eksudātu un audu izmaiņām ir lielā mērā pretrunīgi. Vienīgais, ko var atzīmēt ar pilnīgu pamatojumu, ir tas, ka ievērojams skaits aktivēto T-limfocītu parasti atrodami tuberkulārās granulomos.

Ir jēga turpināt vēl divus punktus, kas ir nepieciešami, lai saprastu imunoloģisko mehānismu nozīmi tuberkulozes ārstēšanā cilvēkiem:

• pacientiem ar AIDS ir īpaši liela rezistence pret vairāku zāļu lietošanu;
• vairāku zāļu rezistences gadījumā (un, ja nav HIV infekcijas), imunitātes traucējumi (pirmkārt, T-šūnu komponents) ir īpaši nozīmīgi.

Tuberkulozē plaši tiek pielietotas dažādas imunokorekcijas metodes: tās galvenokārt ir zāles, kas galvenokārt darbojas T-šūnu imunitātei un mononukleāro fagocītu sistēmai (aizkrūts hormoni, izofons, licopīds, poloksidonijs uc). kā arī veselas (novājinātas) mikobaktērijas un to sastāvdaļas.

Tuberkulozes molekulārā bioloģiskā diagnostika

Molekulārās bioloģijas metodes infekcijas slimību diagnosticēšanā galvenokārt ietver metodes, kas balstītas uz baktēriju un vīrusu patogēnu manipulācijām ar genomiskiem materiāliem, lai noteiktu specifiskus ģenētiskos materiālus - DNS segmentus ar specifisku šīs sugas vai patogēnu celmu specifiku. DNS sekvences gēnos, kas nosaka patogēna jutību pret noteiktām zāļu vielām, kā arī analizē šo funkciju dažu patogēnu gēnu linu aktivitāte. Molekulārās bioloģiskās metodes plaši izmanto zinātniskajos pētījumos un praktiskā pielietojumā dažādu baktēriju un vīrusu infekciju diagnosticēšanā un kontrolē pēc tam, kad 1985. gadā atklāja Kerry Mulllis (1989. gada Nobela prēmijas laureāts) par polimerāzes ķēdes reakciju.

Polimerāzes ķēdes reakcijas metodes principi un iespējas

PCR ļauj jums in vitro vairot (vairoties) nukleotīdu secību (patogēnu DNS fragmentu) vairākas stundas miljonu reižu laikā. Reakcijas vadīšana atsevišķu DNS virzienu klātbūtnē nosaka analīzes ārkārtīgi augsto jutību.

Dažu DNS ķēdes posmu nukleotīdu secība nosaka mikroorganisma ģenētisko identitāti, kas izskaidro PCR augsto specifiku.

Šīs metodes vērtība mikobaktēriju tuberkulozes īpašību noteikšanai un izpētei ir saistīta ar bioloģiskās īpašības  mikroorganisms ar ļoti lēnu augšanu: Mycobacterium tuberculosis DNS divkāršošanās laiks audzēšanas laikā ir 12-24 stundas.

PCR metodes princips ir pastiprināšana - vairāki, miljoniem reižu. specifiskas DNS sekvences sekciju pavairošana mēģenē mikrovolumā ar sekojošu trīs reakcijas posmu ciklisku atkārtošanos, katrs no tiem notiek citā temperatūras režīmā:

• I posms - divslāņu DNS denaturācija, sakarsējot ar tās ķēdes novirzi;
• II posms - primeru (primer oligonukleotīdu) komplementārā saistīšanās (hibridizācija) līdz stingri specifisko ķēžu gala sekcijām, kas izvēlētas DNS fragmenta vairošanai;
• III posms - DNS fragmenta ķēdes pabeigšana, izmantojot termostabilu DNS polimerāzi.

Lai pastiprinātu in vitro, jābūt veidnes DNS molekulām. četri dezoksinukleozīdu trifosfātu (nukleotīdu) veidi, kas satur atbilstošas ​​slāpekļa bāzes: adenīns (A), timīns (T), guanīns (D), citozīns (C); mākslīgi sintezēti sēklu oligonukleotīdi (primeri), kas sastāv no 18-20 bāzes pāriem; termostabils DNS polimerāzes enzīms, kura temperatūras optimums ir 68-72 o C un magnija joni.

PCR specifika ir atkarīga no DNS fragmenta izvēles. Saskaņā ar to sintēze sānu sēklu oligonukleotīdi. Hibridizācijas specifiku un DNS ķēdes pabeigšanu nosaka ar šādu slāpekļa bāzu pāru komplementaritātes principu: adenīna-timīns, guanīna-citozīns.

Lai noteiktu mikobaktēriju tuberkulozes kompleksa genomu, vairumā testa sistēmu visefektīvākais amplifikācijas mērķis ir DNS fragments IS6110, kas lielākajā daļā mikobaktēriju tuberkulozes celmu ir ievērojams skaits (10-20) atkārtojumu genomā, kas kopā ar specifiskumu nodrošina augstu analīzes jutību. Tajā pašā laikā ir aprakstīti Mycobacterium tuberculosis celmi ar nelielu atkārtojumu skaitu vai IS6110 fragmenta neesamību.

DNS molekulu izolēšana no bioloģiskā parauga

PCR gadījumā ierosinātāja DNS ir jāizolē no bioloģiskā materiāla minimālā daudzumā, minimālais daudzums neeksistējošas DNS un dažādi fermentu inhibitori - DNS polimerāze.

Paraugu sagatavošana jāveic apstākļos, kas novērš pētāmo paraugu savstarpēju inficēšanos ar izdalītajām DNS molekulām. Tas prasa telpas iepriekšēju apstrādi ar ultravioleto gaismu, grīdām un galdu un ierīču darba virsmām - hloru saturošiem šķīdumiem. Tāpat ir nepieciešams izmantot tīrus cimdus, vienreizējās lietošanas mēģenes un padomus automātiskām pipetēm.

Lai izolētu Mycobacterium tuberculosis DNS no klīniskajiem paraugiem (cerebrospinālais šķidrums, bronhiālā skalošana), kas nesatur lielu skaitu leikocītu, šūnu atliekas vai sāļus, pietiek ar parauga centrifugēšanu 3-4 tūkstoši apgriezienu minūtē, pievienojot 20-30 μl 2% šķīduma nogulsnēm tritons X-100 un silts 30 minūtes 90 oC temperatūrā.

Krēpu paraugu pagatavošanai nepieciešama efektīva atšķaidīšana, par kuru parasti izmanto 4% nātrija hidroksīda šķīdumu un N-acetil-L-cisteīnu (NALC) 50-80 mg paraugā atkarībā no parauga viskozitātes. NALC šķīdums jāsagatavo ex tempore vai NALC pulveris var tikt pievienots sausā veidā tieši paraugam. Pēc atšķaidīšanas paraugus centrifugē 15 minūtes ar 3,5–4000 apgriezieniem minūtē (3000 g) 50 ml mēģenēs ar skrūvējamu vāciņu, t.i. tādos pašos apstākļos, kādi ieteicami pirmssēšanas sagatavošanai.

DNS ekstrakcijai no nogulumiem biežāk tiek izmantota metode, kas balstās uz 5-6 molārā guanidīna izotiocianāta šķīduma kā lizējošā reaģenta un mikroporainu silīcija daļiņu ("diatomītu zemes") sorbējošo DNS molekulu izmantošanu. Nespecifiskas vielas, ieskaitot iespējamos inhibitorus, pēc tam mazgā 2,5 molāru guanidīna izotiocianāta šķīdumā un etanola šķīdumā, pēc tam DNS molekulas tiek desorbētas ūdenī, un šos paraugus izmanto PCR. Lai vienkāršotu DNS ekstrakcijas tehnoloģiju, „diatomīta zeme” bieži tiek aizstāta ar magnētiskām mikrodaļiņām, kas pārklātas ar silīcija dioksīdu. Vienlaikus centrifugēšanas vietā tiek izmantota īpaša magnētiskā caurule mikrotesta caurulēm, lai nogulsnētu daļiņas.

Krievijā ir izstrādāta oriģināla mikobaktēriju imunomagnētiskās nošķiršanas metode, kam seko patogēna DNS ekstrakcija. Mycobacterium tuberculosis imunomagnētiskai atdalīšanai tiek izmantoti 3-5 µm ferropartikulāri, kas pārklāti ar silīcija oksīdu un kuriem poliklonālās (truša) antivielas pret tuberkulozes mikobaktērijām ir piestiprinātas ar ķīmisko savienojumu. Pēc sārmainas lizes krēpu paraugi tiek neitralizēti ar skābu Tris-HCl šķīdumu un inkubēti ar imunomagnētisko sorbentu. Tad imunopola daļiņas tiek savāktas, izmantojot magnētisko nūju ar nomaināmu uzgali, kas pārnests uz mikrovadījumu, nogulsnēts. Uzklāj 20-30 μl 2% Triton X-100 šķīdumu un 30 minūtes karsē 90 ° C temperatūrā. Supernatantu izmanto kā DNS veidni PCR analīzei.

Sarežģīta problēma ir Mycobacterium tuberculosis DNS izolācija no biopsijas paraugiem. Biopsijas lizei tiek izmantots enzīms - proteināze K gala koncentrācijā 200-500 mg / l 56 o temperatūrā. Tālāk piešķiriet vienu no zināmām metodēm. Biopsijas paraugu PCR analīzē konstatētais nespecifiskās DNS pārpalikums bieži palīdz nomākt reakciju, kas prasa atkārtotu DNS ekstrakciju.

Rezultātu noteikšanas metodes

Pēc reakcijas pabeigšanas amplificētie patogēnu DNS fragmenti tiek identificēti, izmantojot dažādas metodes.

Labi zināma gēla elektroforēzes metode. Vienlaikus iegūtais DNS fragments tiek identificēts ar pozitīvu kontroli, kas satur vēlamo specifisko DNS fragmentu, vai iepriekš zināmu fragmenta lielumu (nukleotīdu pāru skaitu), ko nosaka, izmantojot standarta molekulāro marķieri.

Konkrētas krāsvielas, etīdija bromīda klātbūtnē, kas iekļauta divslāņu DNS. Sintezētais DNS fragments tiek konstatēts kā josla, kas mirgo ultravioletā starojuma iedarbībā.

DNS fragmenta lielumam, kas noteikts ar elektroforēzi pēc attāluma no sākuma, jāatbilst zināmam molekulmasas marķierim vai pozitīvai kontrolei.

Citas metodes PCR rezultātu noteikšanai balstās uz vienas ķēdes PCR produktu hibridizāciju ar tiem pievienotu biotīnu iezīmētu DNS zondi, kam seko noteikšana ar enzīmu reakciju, piemēram, saistoties ar streptavidīna-sārmainās fosfatāzes konjugāta biotīnu.

Pamatojoties uz šāda veida noteikšanu, ir izveidoti PCR analizatori, kuros PCR rezultātu noteikšana tiek veikta automātiski, izlasot optisko blīvumu paraugos pēc fermentatīvas reakcijas.

Šo metožu trūkumi ir intralaboratoriskā piesārņojuma iespējas ar diezgan īsiem DNS molekulu fragmentiem. Šīs molekulas, izlaižot jaunizpētītajos paraugos, kļūst par PCR matricu un noved pie viltus pozitīviem rezultātiem.

Šajā sakarā, lai novērstu viltus pozitīvus rezultātus, tiek ieviesti stingri noteikumi telpu atdalīšanai un izolēšanai: DNS izolēšanai no bioloģiskajiem paraugiem; telpas tīras zonas rezultātu atklāšanai (elektroforēze). Šīs telpas ir potenciāla piesārņojuma zona. Vēl viena izolēta teritorija ir tīra telpa testa DNS paraugu ievadīšanai mēģenēs ar reakcijas maisījumu PCR. Visbeidzot, tiek pieņemts, ka galvenais instruments - DNS pastiprinātājs - jāpārvieto uz atsevišķu, iespējams, biroja telpu.

Lai novērstu piesārņojumu ar iepriekšējo reakciju produktiem - ar ampiconiem, dažas PCR pārbaudes sistēmas deoksinukleozīdu timidīna vietā satur deoksinukleozidurīdu, kas, in vitro sintezējot, tiek ievietots tā vietā atbilstošā vietā, t.i. slāpekļa bāze timīns, kas atrodas dabiskajā DNS, tiek aizstāts ar uracilu. Uracila-DNS glikozilāze, kas pievienota reakcijas maisījumam analizējamajam materiālam, iznīcina tikai piesārņojošos fragmentus ar deoksuridīnu, bet ne dabisko analizēto DNS. satur deoksitimidīnu. Turpmākā karsēšana 94 ° C temperatūrā inaktivē šo fermentu un neietekmē PCR amplifikāciju.

Ir testēšanas sistēma, kuras pamatā ir rRNS izotermiska pastiprināšana, kurai vispirms tiek veikta DNS molekulu reversā transkripcija un sintēze. kas savukārt ir matrica turpmākai RNS molekulu sintēzei. RNS amplikoni tiek konstatēti, izmantojot hibridizācijas laikā reakcijas mēģenē, izmantojot akridīna krāsotu DNS zondi. Šī metode papildus augstai jutībai ir tā, ka tā veic analīzi vienā mēģenē, kas novērš piesārņojumu. Autori uzskata, ka šīs metodes jutīgums elpceļu paraugos sasniedz 90% ar specifiskumu 99-100%.

Jaunas noteikšanas metodes tiek īstenotas reālā laika PCR. Šīs metodes galvenokārt atšķiras ar to, ka PCR un tā rezultātu noteikšana tiek veikta vienlaicīgi vienā slēgtā caurulē. Tas ne tikai tehnoloģiski vienkāršo analīzes metodi, bet arī novērš laboratorijas telpu un testa paraugu piesārņošanu ar produktiem, kas ir pirms PCR.

Reālā laika PCR laikā rezultāti tiek atklāti fluorescences rezultātā, kas rodas, fluorinētai DNS zondei hibridizējoties ar specifisku DNS fragmentu, kas pastiprināts PCR laikā. Fluorogēno DNS zondu struktūra ir konstruēta tā, ka fluorescējošais marķieris tiek atbrīvots fermentu reakcijas rezultātā vai distancēts no fluorescences atdzesēšanas molekulas tikai specifiskās hibridizācijas laikā ar vēlamo DNS molekulu, kas pastiprināta PCR laikā. Palielinoties molekulām, kas hibridizējas ar zondi, fluorescences palielināšanās līdz nosakāmam līmenim ir proporcionāla pastiprinātā produkta molekulu skaitam. Tā kā katras PCR cikla laikā DNS fragmentu molekulu skaits ir dubultojies, cikla numurs, no kura nosaka un palielina fluorescenci, ir apgriezti proporcionāls DNS molekulu skaitam sākotnējā paraugā. Ja reakcijā kā kalibrators tiek ievadītas vairākas Mycobacterium tuberculosis attiecīgās DNS fragmenta molekulu dažādas koncentrācijas, tad DNS genomu skaitu pētāmā materiālā var aprēķināt, izmantojot datorprogrammu.

Katrs standarta paraugs tiek dublēts. Kvantitatīvs kritērijs ir minimālais PCR ciklu skaits, kas nepieciešami konstatētās fluorescences sākumam un pieaugumam. Absisss ir ciklu skaits; ordinātu ass ir fluorescences vērtība. DNS koncentrācija ir apgriezti proporcionāla ciklu skaitam, kas nepieciešams, lai parādītu fluorescenci. Labās kolonnas (21-32) logos attiecīgie koncentrācijas cikli tiek apzīmēti. Atšķirības starp 10-kārtīgām DNS fragmentu koncentrācijām 10 2 - 10 6 ml - 3,2-3,4 cikli. Diviem pacientiem IS6110 fragmentu koncentrācija bija aptuveni 10 3 / ml un 10 4 / ml. Ņemot vērā Mycobacterium tuberculosis genomā analizēto fragmentu atkārtojumu skaitu (6-20), mikobaktēriju skaits klīniskajos paraugos ir attiecīgi aptuveni 100 un 1000 šūnas.

PCR izmantošana tuberkulozes diagnostikā

PCR metode visbiežāk tiek izmantota tuberkulozes paātrinātai diagnostikai - mikobaktēriju tuberkulozes noteikšanai klīniskajos paraugos: krēpās. bronhu mazgāšana, pleiras eksudāts, urīns, cerebrospinālais šķidrums, osteolīzes punkcijas, sieviešu dzimumorgānu aspirāti un dažādi biopsijas paraugi. Pētījumā Holandē tika pētīti aptuveni 500 krēpu un bronhu tamponu paraugi no 340 pacientiem ar apstiprinātu plaušu tuberkulozes diagnozi, salīdzinošo PCR jutību, kultūru un uztriepes mikroskopiju. Analīzes jutīgums bija attiecīgi 92,6,88,9 un 52,4%. Šajā gadījumā visu metožu specifika bija aptuveni 99%.

Tika salīdzināta mikobaktēriju tuberkulozes noteikšanas efektivitāte ar uztriepes mikroskopijas metodēm, sēklas uz Lowenstein-Jensen barotni, WASTES testēšanas sistēmu un PCR analīzi. PCR jutība bija 74,4%, mikroskopija - 33,8%, sēšana vidējā blīvumā - 48,9% un ATKRITUMI - 55,8%. Vidējais atklāšanas laiks sēklām Levenshtein-Jensen vidē ir 24 dienas. ATKRITUMI - 13 dienas, PCR - 1 diena.

Tiek apspriestas arī iespējas izmantot PCR kā jutīgu un ātru metodi tuberkulozes ārstēšanas efektivitātes uzraudzībai.

Mycobacterium tuberculosis DNS noteikšana ar PCR ar efektīvu ķīmijterapiju tiek noteikta ilgāk - vidēji 1,7 mēnešus, salīdzinot ar baktēriju sekrēciju, kas konstatēta fluorescējošā mikroskopijā, un 2,5 mēnešus, salīdzinot ar bakterioloģisko izmeklēšanu.

Ekstrapulmonālās tuberkulozes diagnostika

PCR kā jutīgas metodes vērtība ir īpaši liela ekstrapulmonālajām formām, jo ​​klīniskās rentgena metodes un tradicionālās bakterioloģiskās metodes mikobaktēriju tuberkulozes noteikšanai diagnostiskajos materiālos ir neefektīvas.

Pārbaudot urīna paraugus, PCR analīzes rezultāti bija pozitīvi 16 no 17 pacientiem ar urīnceļu aktīvo tuberkulozi un 4 pacientiem ar nieru neaktīvo tuberkulozi un 39 pacientiem ar urīnceļu sistēmas slimībām.

PCR analīzes efektivitāte tika pierādīta, pētot kaulu smadzeņu aspirātus pacientiem ar neskaidras ģenēzes drudzi, kas aizdomas par slimības tuberkulozo raksturu. Tuberkulozes limfadenīta diagnosticēšanai bērniem tika pētīti 102 punkcijas aspirāti un 67 bērnu ar biopsiju limfadenītu biopsijas paraugi. Tika iegūti pozitīvi rezultāti: reālā laika PCR - 71,6%. fluorescences mikroskopija - 46,3%. kultūras studijas - 41,8%. Pētījumā ar 50 limfmezglu biopsijām pacientiem ar kaķu skrāpējumiem, visi rezultāti bija negatīvi. Tādējādi tika pierādīta PCR analīzes 100% specifika. Tajā pašā darbā limfmezglu punkcijas biopsija parādīja iespēju atklāt M. avium.

Kā zināms, sieviešu dzimumorgānu tuberkulozes diagnosticēšana ar neauglību ir viena no grūtākajām diagnozes problēmām. Pētījumā, kurā tika izmantota endometrija biopsiju, endometrija aspirātu un Douglas telpas šķidruma paraugu PCR, 14 (56%) no 25 pacientiem, kuri tika pārbaudīti laparoskopiski ar aizdomām par tuberkulozi, bija pozitīvi rezultāti. Izmantojot uztriepes mikroskopijas un kultūras pētījumus, ieguva attiecīgi 1 un 2 pozitīvus rezultātus. Šie gadījumi bija arī pozitīvi PCR. Lielākā daļa PCR pozitīvo rezultātu bija saistīti ar gadījumiem ar raksturīgām tuberkulozes pazīmēm saskaņā ar histoloģisko izmeklēšanu; mazāk, ja ir aizdomas, ka laparoskopijā ir tuberkuloze. Tikai viens pozitīvs PCR analīzes rezultāts tika iegūts bez laparoskopiskiem datiem par tuberkulozi.

Diagnosticējot tuberkulozes ekstrapulmonālās formas, ārstiem bieži ir jautājums par patogēna noteikšanu asins paraugu PCR pētījumā. Literatūras dati liecina, ka Mycobacterium tuberculosis DNS noteikšana no asins paraugiem ir iespējama ar progresējošu HIV infekcijas formu palīdzību. Mycobacterium tuberculosis DNS tika konstatēta tikai dažu orgānu vispārinātas tuberkulozes gadījumā pacientiem ar transplantētu nieru un imūndepresiju.

Mikobaktēriju identifikācija

PCR metode var būt diezgan efektīva, lai ātri identificētu mikobaktēriju tuberkulozes kompleksu un dažus ne-tuberkulozes mikobaktēriju veidus pēc to sākotnējās augšanas. Šajā gadījumā PCR izmantošana var ietaupīt 7-10 dienas, kas nepieciešamas turpmākajai kultūras identifikācijai. pozitīvs rezultāts. Pētījumi ar PCR ir tehniski ļoti vienkārši, jo nav nepieciešama sarežģīta paraugu sagatavošana klīniskajam materiālam, lai panāktu augstu jutību. Pētījumā par 80 pozitīvām kultūrām šādā testa sistēmā (MB VasT. No Organon kompānijas) visi pozitīvie PCR analīzes rezultāti bija stingri specifiski un tika veikti 1 dienu. Lai identificētu citus mikobaktēriju veidus, kad tie iegūti kultūrā, patogēnu DNS hibridizējas ar specifiskiem DNS zondēm, kas marķētas ar akridīnu, un celmus atklāj ar ķīmiluminiscences izpausmi, izmantojot ķīmiluminometru vai nitrocelulozes sloksnes ar vizuālu novērtējumu pēc hibridizācijas. Ar šo komplektu tiek identificēts ierobežots sugu skaits: Mycobacterium tuberculosis komplekss. M. avium, M. avium komplekss, M. kansasii un M. gordonae.

A.Telenti et al. Viņi arī izstrādāja salīdzinoši vienkāršu un lētu klīniski nozīmīgu mikobaktēriju sugu identifikācijas metodi, pamatojoties uz PCR un turpmāku apstrādi ar diviem restrikcijas enzīmiem (fermentiem, kuriem piemīt īpašības, kas ļauj samazināt DNS molekulu noteiktos punktos). Kad tas tiek pastiprināts, DNS fragments. kodē siltuma šoka proteīnu (65 kDa), pēc tam 439 nukleotīdu pāru DNS fragmentu, kas iegūts ar PCR, apstrādā atsevišķi ar diviem fermentiem - Bste II un Hae III. Pēc tam, izmantojot agarozes gēla elektroforēzi, tiek iegūti divi iegūtie produkti, nosakot to izmērus (nukleotīdu pāru skaitu), izmantojot standarta DNS fragmentu kopumu (molekulārās DNS marķierus), kuru garums ir no 100 līdz 1000 nukleotīdu pāriem. Katrā noteiktā sugā (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum) katram restrikcijas enzīmam ir atrodami 2 vai 3 dažāda lieluma DNS fragmenti. Dažādu iegūto DNS fragmentu kombinācija ļauj šīm sugām atšķirt sevi.

Tiek izstrādāta bioloģisko DNS mikroshēmu tehnoloģija. kas palīdzēs noteikt vairāk nekā 100 mikobaktēriju veidus vienā pētījumā.

Sugu identifikāciju var veikt arī, izmantojot 16S rRNS mainīgā reģiona PCR amplifikāciju, kam seko amplikonu secība, salīdzinot ar attiecīgo primāro struktūru, kas ļauj identificēt vairāk nekā 40 mikobaktēriju sugas.

Izmantojot PCR, var veikt arī sugu identifikāciju Mycobacterium tuberculosis kompleksā, ieskaitot M. bovis un M. bovis BCG diferenciāciju. Šim nolūkam tiek analizēta noteiktu gēnu klātbūtne vai neesamība RD1 genomajos reģionos. RD9 un RD10. M. bovis BCG nav RD1, bet tā ir virulentās sugās, ieskaitot M. bovis.

Mycobacterium tuberculosis zāļu jutības noteikšana, izmantojot PCR

Molekulāro ģenētisko metožu uzdevumi, lai noteiktu Mycobacterium tuberculosis medikamenta jutību vai rezistenci, ir samazināti, lai noteiktu mutācijas noteiktās zināmo gēnu nukleotīdu sekvencēs. Galvenās metodes balstās vai nu uz šo secību tiešu nolasīšanu (sekvencēšanu) pēc amplifikācijas, vai uz biotīnu iezīmētu DNS fragmentu hibridizāciju, kas pastiprināti PCR laikā ar DNS zondēm. Abi varianti liecina par to, ka ir jāidentificē nukleotīdu sekvences, kas, lietojot DNS zondes, noved pie nitrocelulozes membrānas hibridizācijas vai defektēšanas, izmantojot fermentu konjugātu (streptavidīna-sārmainā fosfatāze) - LIPA-Rif-TB metodi.

Fluorescences mērīšanas metodi DNS mikroshēmās, kas lokāli piestiprinātas pie mikrosītiem, kas papildina zināmās mutācijas PCR pastiprinātos gēnu reģionos, kuri ir atbildīgi par zāļu jutību vai rezistenci, sauc par mikrobiochip metodi. Pamata algoritms šī pētījuma veikšanai ir šāds. Pēc DNS izolācijas no mikobaktēriju klīniskā parauga vai kultūras ir nepieciešams veikt PCR, lai pastiprinātu atbilstošos groV gēna fragmentus, kas ir atbildīgi par zāļu jutību pret rifampicīnu, vai katG un inhA gēnus, kas kodē mikobaktēriju proteīnus, kas ir atbildīgi par izoniazīda jutību. PCR rezultātus novērtē, izmantojot agarozes gēla elektroforēzi, kas apstiprina atbilstošo vēlamo DNS fragmentu sagatavošanu. Tam seko 2. kārta PCR, lai ievadītu fluorescējošo marķējumu DNS. PCR rezultātus atkal apstiprina ar gēla elektroforēzi. Pēc tam tiek veikta hibridizācija (inkubācija pa nakti), kam seko iegūto materiālu mazgāšana biocipā, kas ir liels īsu DNS ķēžu skaits (zondes), kas piestiprinātas pie nelielas stikla plāksnes, kas papildina mikobaktēriju jutīgās tuberkulozes nukleotīdu sekvences iespējamo mutāciju punktos. kā arī mutantu sekvences, kas ir atbildīgas par zāļu rezistenci. DNS zondes izvietojums uz plāksnes ir stingri noteikts, un tiek noteikts novērotā fluorescences līmenis hibridizācijas laikā, lai noteiktu rezultātu, izmantojot īpašu lasītāju. Šajā sakarā analīzes rezultātus nosaka, izmantojot īpašu datorprogrammu.

Pēdējos gados ir izstrādātas arī alternatīvas metodes Mycobacterium tuberculosis narkotiku jutības noteikšanai, pamatojoties uz reāllaika PCR tehnoloģiju, ļaujot šos pētījumus veikt slēgtā caurules režīmā.

Att. 13-13 atspoguļo Mycobacterium tuberculosis klīnisko kultūru analīzes rezultātus, nosakot zāļu rezistenci pret rifampicīnu, izmantojot reālā laika PCR: 218 - kontrolparaugu (jutīgs pret rifampicīnu); 93 - pozitīva Ser-Trp TCG-TGG mutācijas kontrole; 4482 - pozitīva kontrole Ser-Leu TCG-TTG mutācijai; 162-322 - eksperimentālie paraugi. Kinetisko pastiprināšanas līkņu aprēķins 4 kanāliem: kanāls 1: 393 - pozitīva kontrole Ser-Trp TCG-TGG mutācijai; kanāls 2: 4482 - pozitīva kontrole Ser-Leu TCG-TTG mutācijai; 162, 163, 172, 295 - eksperimentālie paraugi; 4. kanāls: visu eksperimentā iesaistīto paraugu kinētiskās pastiprināšanas līknes. Pozitīva kontroles pastiprināšanas reakcija. Secinājumi: analīzes rezultāti atklāja šādas mutācijas, kas nosaka rezistenci pret rifampicīnu: paraugos 162,163,172,295 - Ser-Leu TCG-TTG. To pašu principu izmanto, lai noteiktu pretestību pret izoniazīdu katG un inhA gēniem, kas nosaka visbiežākās mutācijas.

Muskobaktēriju tuberkulozes celmu identifikācija

Vispētītākā Mycobacterium tuberculosis identifikācijas metode ir tehnoloģija, ko sauc par restrikcijas fragmenta garuma polimorfismu (RFLP vai RFLP angļu valodā) un kas balstās uz Mycobacterium tuberculosis DNS fragmentēšanu (ierobežošanu) ar Pvu II enzīmu un pēc tam iegūto fragmentu hibridizāciju ar noteiktām specifiskām DNS sekvencēm. tā atkārtotais elements ir IS6110. Intraspecific variabilitāte tiek realizēta, pateicoties atšķirīgajam IS6110 atkārtojumu skaitam un to atrašanās vietai DNS. kā arī attālumu atšķirība starp noteiktiem uzbrukuma punktiem fermentu ierobežojumiem (restrikcijas vietām) un elementam IS6110. Šī tehnoloģija ir ļoti sarežģīta un laikietilpīga. Pēc DNS, kas izolēta no Mycobacterium tuberculosis kultūras, ar restrikcijas enzīmu, apstrāde tiek veikta ar gēla elektroforēzi, tad dažāda garuma DNS fragmenti tiek pārnesti uz nitrocelulozes membrānu, hibridizēti ar IS6110 fragmentiem un rezultāti tiek konstatēti, izmantojot enzīmu reakciju. Iegūtais joslu raksturojums raksturo specifiskas Mycobacterium tuberculosis celms DNS. Izmantojot datora analīzi, atklājās celmu identitāte vai afinitāte. Lai gan RFLP metode ir visdiskriminējošākā, t.i. atklāj lielāko atšķirību skaitu analizētajos celmos, tas ir neefektīvs ar nelielu skaitu (mazāk nekā 5) IS6110 atkārtojumu, kas novēroti dažos celmos. Att. 13-14 attēlo celmu RFLP rakstīšanas rezultātus.

Alternatīva var būt spoligotipu noteikšanas metode (spoligotipizēšana) - DNS starpliku secību polimorfisma analīze - starp starp tiešo DR reģiona atkārtošanos. Veicot celmu spoligotipizēšanu, PCR tiek veikta ar primeriem, kas ierobežo DR reģionu, pēc tam veidojas dažāda garuma fragmenti, kas hibridizējas ar DNS mainīgajiem starpreģioniem. Ir parādīta DR reģiona distancējošo secību analīze. Pēc pētnieku domām, tas ir vienkāršāks, produktīvāks un piemērots primārajai celmu pārbaudei un provizoriska epidemioloģiska analīze, kā arī tieši klīniska materiāla izpēte.

Acīmredzot efektīvāka un tehnoloģiski pieejamāka metode ir VNTR (angļu valodas vārdu saīsinājums) vai metode Mycobacterium tuberculosis DNS specifisko tandēmu atkārtojumu mainīgā skaita noteikšanai. Šī metode ir balstīta tikai uz PCR izmantošanu un neprasa papildu manipulācijas. Tā kā tandēma atkārtojumu skaits dažādos celmos un dažādos lokos ir atšķirīgs, dažāda lieluma fragmenti tiek noteikti un analizēti, iegūstot PCR produktu elektroforegramu. Pēc pētnieku domām, izmantojot VNTR, tika panākta lielāka celmu diskriminācijas pakāpe nekā izmantojot RFLP metodi.

Pēdējos gados liela uzmanība ir pievērsta Mycobacterium tuberculosis W-Beijing ģimenes celmu izplatībai (dažreiz tos sauc par Pekinas celmu), kas lielā mērā ir rezistenti pret narkotikām.

Pamatprasības molekulārās bioloģiskās izpētes kvalitātei

PCR pamatdokumenti

Krievijas Veselības ministrijas rīkojumi: Nr. 45, 2000. gada 7. februāris. Nr. 109, 2003. gada 21. marts. Nr. 64, 2000. gada 21. februāris. Metodiskās vadlīnijas: 1.3.1888-04 “Darba organizēšana PCR pētījumos ar patogēno bioloģisko inficēto materiālu III-IV patogenitātes grupu aģenti "; 1.3.1794-03 "Darba organizēšana PCR pētījumos ar I-II patogenitātes grupu mikroorganismiem inficētiem materiāliem". 2003; 3.5.5.1034-01 "I-IV patogenitātes grupu baktērijām inficētā materiāla dezinfekcija, izmantojot PCR metodi", 2001. Pielikums 11. instrukcijai par vienotu mikrobioloģisko pētījumu metodēm tuberkulozes atklāšanai, diagnosticēšanai un ārstēšanai.

Personāls

Molekulāros bioloģiskos pētījumus var veikt klīniskās laboratorijas diagnostikas ārsti, bakteriologi, virologi, klīniskās diagnostikas laboratorijas biologi, kā arī speciālisti ar vidējo medicīnisko izglītību, kuri ir specializējušies un apmācīti iepriekš.

Ierīces telpu laboratorija

Ir nepieciešamas šādas laboratorijas iekārtas:

• Paraugu apstrādes apgabals ir laboratorija, kas pielāgota darbībai ar patogēnuma III-IV grupas infekcijas līdzekļiem saskaņā ar metodoloģiskajām vadlīnijām 13.1888-04.
• Reakcijas maisījumu sagatavošanas zona PCR - laboratorijas telpa, kas nodrošina aizsardzību pret iekšējo laboratorijas piesārņojumu - "tīro" zonu.
• Ja PCR produktu analīzei izmanto elektroforēzes metodi vai hibridizāciju. laboratorijas telpai, kurā pavairotie DNS fragmenti tiek izvadīti no amplifikācijas caurules un tādējādi var tikt izlaisti vidē saskaņā ar PCR laboratoriju prasībām (Vadlīnijas 1.3.1794-03, pamatnostādnes 1.3.1888-04), jābūt pilnīgi izolēti no iepriekšējos punktos norādītajām telpām. Jāizslēdz kustība no elektroforēzes zonas uz paraugu apstrādes zonu un jebkura personāla, aprīkojuma, materiālu un priekšmetu „tīro” zonu, kā arī gaisa pārnesi caur ventilācijas sistēmu vai caurvēja rezultātā. Šī zona nav nepieciešama PCR produktu fluorimetriskai noteikšanai.
• Dokumentācijas un rezultātu apstrādes telpa ir aprīkota ar datoriem un nepieciešamo biroja aprīkojumu. Šajā telpā var atrast iekārtas, lai atklātu PCR produktus, neatverot cauruli. - fluorescējoši PCR detektori un termocikeri reāllaika PCR.

Sanitārās un epidemioloģiskās prasības krēpu primārajai ārstēšanai ir līdzīgas standarta mikrobioloģiskajām prasībām strādāt ar tuberkulozes mikobaktērijām.

PCR diagnostikas laboratorijas aprīkojuma komplekts

Laboratorijas paketē ietilpst iekārtas šādām telpām.

• paraugu sagatavošanas telpā ir šādas iekārtas: II lamināra aizsardzības klase "SP-1.2": cietvielu termostats ar apsildāmu vāku Eppendorf tipa caurulēm; mikrocentrifūga pie 13 000 apgr./min; centrifūga ("Vortex"); ledusskapis ar temperatūras diapazonu no -20 ° C līdz +10 ° C; mainīgās tilpuma pipetes no Proline sērijas; sūknis ar OM-1 kolbas slazdu; pipetes statīvs; statīvs darbavietā 200x0,5 ml; statīvs darbavietā 50x1,5 ml; plaukti uzglabāšanas caurulēm 80x1,5 ml;
• telpa reakcijas maisījuma pagatavošanai: aizsargkameras PCR kaste (“Laminar-110 cm”); Vortex centrifūga; mainīgās tilpuma pipetes no progresīvās līnijas; pipetes statīvs; trijkāja darbavieta 200x0,2 ml; plaukti uzglabāšanas caurulēm 80x1,5 ml; ledusskapis ar temperatūras diapazonu no -20 o C līdz + 10 o C;
• elektroforēzes telpa: kamera horizontālai elektroforēzei; barošanas avots; transilluminators;
• DNS pastiprinātājs vai nukleīnskābes analizators (reālā laika PCR) ar datoru un programmatūru; var ievietot jebkurā brīvajā telpā. Ja izmantojat PCR tehnoloģiju reālā laikā. nav nepieciešama elektroforēzes telpa.

Ārējā kvalitātes kontrole

Lai iegūtu pārliecību par objektīvi ticamu rezultātu iegūšanu, laboratorijām jāpiedalās laboratorijas pētījumu ārējās kvalitātes novērtēšanas sistēmā.

Kvalitātes kontroles sistēmas dalībnieki saņem; 12 ampulas ar liofilizētām baktēriju šūnu suspensijām, no kurām divas satur E. coli E. coli, 3 ampulas ar mikobaktēriju tuberkulozi (avirulents celms) pie koncentrācijas 10 2 / ml; 3 ampulas ar līdzīga celma šūnām ar koncentrāciju 10 4 / ml; 2 ampulas ar ne-tuberkulozu mikobaktēriju M. avium-intracellulare un M. kansasii koncentrācijā 10,5 / ml.

Sadalītie ārējās kvalitātes novērtēšanas testi ir iepriekš pārbaudīti divās neatkarīgās laboratorijās ar plašu pieredzi šajā jomā.

Tuberkuloze ir bīstama infekcijas slimība ar augstu sociālo nozīmi. Bieži slimībai nav izteiktu izpausmju, un bērni ar tuberkulozi ir infekcijas avots citiem. Tāpēc šodien, vairāk nekā jebkad agrāk, ir svarīgi pilnībā un savlaicīgi diagnosticēt bērnu tuberkulozi.

Tomēr strīdi par vakcināciju pret tuberkulozi grūtniecības un dzemdību slimnīcā un tās turpmākā ikgadējā diagnoze, izmantojot Mantoux testu, turpinās jau ilgu laiku. Daudzi vecāki raksta atteikšanos no Mantus, meklējot informāciju par alternatīvām diagnostikas metodēm, ticamību un rezultātu precizitāti. Un tas ir svarīgi, jo tie, kuri atsakās izlasīt Mantou, saskaras ar problēmām, ienākot bērnudārzs  un skolai, jo viņiem ir jāveic rentgena stari un TB ārsta sertifikāti par tubinfekcijas neesamību. Kādas ir tuberkulozes diagnostikas metodes?

Mantoux tests

Intrakutānas Mantoux testa noteikšana ir visizplatītākā metode tuberkulozes diagnosticēšanai. Tās būtība ir tāda, ka bērna ķermenī - tuberkulīns - tuberkulozes mikrobaktēriju sastāvdaļa tiek ievadīta īpaša viela. Trīs dienas vēlāk ārsts novērtē ķermeņa reakcijas pakāpi.

Mantoux tests tiek veikts bērniem no viena gada vecuma līdz pilngadībai.

Pros:

Zemas izmaksas, vienkāršība, masveida izmantošana, iespēja sasniegt lielu bērnu skaitu.

Mīnusi:

Nestandarta narkotiku lietošanas metode, īpaša piesardzība injekcijas vietā, viltus pozitīvu un viltus negatīvu rezultātu varbūtība, ārējo un iekšējo faktoru ietekme uz testa rezultātu.

Mantoux tests nav vakcīna, kā daudzi vecāki kļūdaini domā. Šis ir īpašs tests, kas parāda imunitātes esamību pret mikobaktērijām organismā. Testa laikā tiek novērtēta ķermeņa vietējā ādas reakcija uz mikobaktēriju fragmenta ievadīšanu. Reakcijai un šo fragmentu imunitātes novērtēšanai pietiek. Tajā pašā laikā infekcijas risks nav pietiekams, jo tas ir niecīgs.

Šīs vielas ieviešana, ķermenis atzīst par "tuberkulozes infekciju", un tas sāk reakciju.

Reakcijas mehānika:

Ja persona vismaz reizi dzīvē ir nonākusi saskarē ar mikobaktērijām, reakcija būs pozitīva, jo organismā ir imūnsistēmas šūnas, kas sniegs ādas reakciju;
   ja nebūtu kontaktu, tad nebūs reakcijas, jo nebūs imunitātes.

Mantoux testa rezultāti:

normāla imunitāte  (papule no 5 līdz 15 mm). Ja bērnam ir bijis kontakts ar mikrobi, kas nav nonācis slimībā, ja viņš ir vakcinēts pret tuberkulozi, reakcija uz apvalku būs pozitīva un mērena. Šie bērni vairs nav nepieciešami.
imunitātes trūkums  (izsekošana no injekcijas, papule līdz 2 mm), ja bērns nekad nav bijis saskarē un nav vakcinēts pret tuberkulozi, vai ir veikts ilgs laiks un imunitāte ir mirusi, tad tests būs negatīvs. Šādus bērnus ieteicams revakcinēt no tuberkulozes.
milzīga atbilde  (papule vairāk nekā 16 mm, tūska, apsārtums, smagākas reakcijas) - nesen inficēta bērna ar tuberkulozi (tubinfekcija), infekcijas esamība organismā. Reakcija būs hiperergiska, ti, stipra un spilgta, un papules lielums ir ļoti liels. Šādam bērnam ir nepieciešama konsultācija ar fthisiatrician, papildu pētījumi un tuberkulozes likvidēšana.

Kādas ir grūtības ar Mantoux testu?

Tā kā testa rezultāti tiek novērtēti pēc trim dienām, šajā laikā daudzi faktori var ietekmēt reakcijas attīstību, kas var samazināt tā ticamību.

Ja bērns nesen ir vakcinēts, tam ir bijusi infekcija vai ir bijusi hroniskas patoloģijas pastiprināšanās, viņš ir alerģisks, nesaskrāpē testa vietu, viņš ir iestrēdzis ar ģipsi, smērēts ar antiseptiskiem līdzekļiem - reakcija var būt traucēta.
   Arī nepareizus rezultātus var sniegt tuberkulīna vadīšanas paņēmiens (ieviests nepareizi) vai kvalitāte (nepareizi uzglabāta vai transportēta).
Reakcija var notikt mikroorganismu klātbūtnē organismā, līdzīgi tuberkulozei vai alerģiju (īpaši ilgstošas ​​dermatīta) klātbūtnē, ieskaitot pašu vielu.
  Tādējādi Mantoux reakcija sniedz tikai vispārēju priekšstatu par to, vai pastāv imunitāte pret tuberkulozi. Par rūpīgākām pārbaudēm tiek nosūtīti tikai bērni ar pozitīvu reakciju. Tie var nebūt inficēti, bet jums vajadzētu tos izslēgt no līdzīgas patoloģijas.

Diaskintest

Šis tests tika izstrādāts, lai izslēgtu viltus pozitīvus. mantoux reakcija.

Pros:

Ļauj precizēt un filtrēt viltus pozitīvas reakcijas Mantoux,
   ļauj novērst kļūdas
   attiecas uz tiem bērniem, kuru vecāki ir pret Mantoux.

Mīnusi:

Var sniegt kļūdainus negatīvus rezultātus agrīnā stadijā  infekcija, līdz 4-6 nedēļām,
   var būt atkarīgs no testa metodes, \\ t
   dārgāka nekā Mantu, var notikt tālu no visur.

Tās īstenošanas metode ir līdzīga Mantu: viela atrodama apakšdelma reģionā, kas atrodas tikai tuberkulozes baktērijās.

Diaskintest novērš reakcijas:

Bērniem, kas inficēti ar nekotogēnām mikobaktēriju sugām (tās ir līdzīgas tuberkulozei, bet slimības nedod),
   bērni, kas nesen ir vakcinēti pret tuberkulozi, un Mantoux reakcija ir strauji pozitīva,
   pretrunīgos Mantoux reakcijas gadījumos,
   ar vecāku atteikšanos no Mantu.

Tādējādi, veicot Diaskintest, tiek novērsti tikai bērni, kuri ir alerģiski pret tuberkulīnu, bērni ar viltus pozitīvām reakcijām, un tieši parāda tos bērnus, kuri ir aizdomīgi par inficēšanos ar tuberkulozi vai kuri ir slimi ar viņiem. Parasti to ieceļ pēc Mantoux testa, lai noskaidrotu un precizētu situāciju.

Kas ietekmē rezultātus?

Tāpat kā Mantoux reakcija, Diaskintestam ir nepieciešami īpaši apstākļi. To nevar likt:

Ar hronisku slimību akūtu un saasināšanos,
   pēc nesenās alerģijas pasliktināšanās, \\ t
   ar ādas slimībām
   mēneša laikā pēc pēdējās vakcinācijas.

Ja Diaskintest reakcija ir pozitīva, atkal ir vēl agri panikas gadījumā, jums jākonsultējas ar TB speciālistu un jāizmanto citas sarežģītākas diagnostikas metodes.

Quantiferon tests

Viena no modernākajām tuberkulozes diagnostikas metodēm, kas palīdz identificēt gan aktīvo, gan latento (latenta) tuberkulozi. Šī laboratoriskā metode atklāj specifisku bērna asinsspiediena interferonu, kas var parādīties tikai bērniem, kas inficēti ar tuberkulozi.

Pros:

Tas notiek in vitro, ārējo faktoru ietekmē nav kļūdu,
100% gadījumu pozitīvs rezultāts norāda uz infekciju ar tuberkulozi, pārbauda nepatiesas reakcijas,
   var veikt neatkarīgi no vakcinācijas un bērna slimībām, nav kontrindikāciju un nevēlamas blakusparādības,
   nav atkarīga no vakcinācijas pret tuberkulozi.

Mīnusi:

10% gadījumu tā rada nepatiesas negatīvas reakcijas (ja tās ir inficētas ar īpašu govju tuberkulozes celmu),
   neatšķir infekciju un slimību (šim nolūkam ir nepieciešams gan Mantoux, gan Diaskintest),
   Tas ir dārgi, jūs nevarat to darīt visās laboratorijās.

Tādējādi tuberkulozes diagnosticēšanai nav ideālas un vienotas metodes. Visas metodes tiek veiktas vispusīgi un pakāpeniski. Tas ļauj jums identificēt bērnus, kuriem nepieciešama konsultācija ar ftiziatriķi, profilaktisku ārstēšanu vai jau pilnvērtīgu pret tuberkulozi ārstētu terapiju.

Kādi testi ir oficiāli atzīti par piemērotiem uzņemšanai bērnu iestādēs?

Mantoux tests ir skrīninga tests, kas novērš bērnus ar normālām un apšaubāmām reakcijām, un visi pārējie testi tiek veikti saskaņā ar TB ārsta norādījumiem, ja Jums ir aizdomas, ka Jums ir tuberkuloze vai nepatiesa reakcija. Daudzi vecāki nolemj, ka tad, kad tests ir jauns un dārgs, tas ir alternatīva, bet ne. Visi testi nav simts procenti un tiek veikti tikai pēc Mantoux.

Proti, procedūra ir šāda: vispirms tiek veikts Mantoux tests, un, ja tas ir pozitīvs, tad, lai izslēgtu viltus pozitīvos testus, vērsties pie phthiziologa un veiciet Diaskintest. Ja šaubas joprojām pastāv, tad kvantferona tests  darīt. Lai gan viņš arī nesaņem visas infekcijas iespējas. Tādējādi šī kombinācija: Mantoux + Diaskintest - šaubu gadījumā vecāki sniedz visprecīzāko „atbildi”, vai ir infekcija vai nē.

Ir normas, saskaņā ar kurām aprūpes iestādēs tiek pieņemti vai nu Mantoux testa rezultāti, vai rentgenstaru rezultāti, vai TB ārsta secinājumi. Pēdējā gadījumā fthisiatrician pats izlemj, ar ko testēt tuberkulozes diagnozi - kvantiferonu vai diaskintestu.

Alena Paretskaja, pediatrs